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实验室生物安全手册 第三版 世界卫生组织WHO

发布时间:2020-06-01浏览次数:

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本手册得到了病控制中心CDC, Atlanta, GA, USA)第 U50/CCU012445-08 资助/ 合作协持。本内容概负责,不代 CDC 的官方意见。

© 卫生组织 2004

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世界卫生组织不保证本出版物中所含信息的完整性和正确性,对因使用这些信息造成的任何损失概不负责


生物安全手册第三版WHO

ii




…………………………………… ……………………………………

1 ……………………………………………………………………………… 1

引言 ……………………………………………………………………………………………… 1

第一部 生物安全指南

2 生物危险度……………………………………………………………………… 7

限的 ……………………………… 7

评估修饰 ………………………… 8

3 础实验室一级和级生物安全…………………………………………… 9

……………………………… 9

验室的设计和设 ……………………………………………………………………… 11

……………………………… 13

医学 ……………………………… 15

…………………………………… 15

……………………………… 16

化学品以及仪器设备安全………………………………………………… 17

4 验室 ……………… 18

……………………………… 18

的设 ………………………… 18

……………………………… 19

医学 ……………………………… 19

5 实验——四级全水 ……………… 22

……………………………… 22

的设 ………………………… 22

6 ………………………… 25

生物 …………………… 26

生物 …………………… 26

生物 …………………… 27

生物 …………………… 27

……………………………… 28




实验室生物安全手册

7 动物运行 ……………… 29

8 动物证指 …………………… 31

第二部 实验室生物安全保障

9 物安的概 …………………… 41

第三部 实验室设备

10 物安全………………………………………………………………45

物安 ……………………………… 46

物安 ……………………………… 46

物安 ……………………………… 49

全柜 ………………………… 49

生物 全柜的选 ……… ………… ………… ………… ………… 49 中生柜的使 ………………………… 50

11 全设 …………………………………………………………………………53

性薄 ………………………… 54

……………………………… 54

匀浆器摇床搅拌器和超声处理器 ……………………………………………………… 55

接种 ……………………………… 55

……………………………… 55

护装 ………………………… 55

第四部 微生物学操作技术规范

12 验室技………………………………………………………………61

中标全操 ………………………… 61

和移器的使 ………………………… 61

染性 ………………………… 62

全柜使 ……………………………… 62

染性食入皮肤的接 ……………… 62

染性 ………………………… 63

……………………………… 63

的使 ……………………………… 63

匀浆器摇床搅拌器和超声处理器的使用 ………………………………………………… 64

磨器使 ……………………………… 64

冰柜和使 ………………………… 64

干感质安 …………………… 64

染性瓿的 ………………………… 65



目录

对血液和其他体液组织及排泄物的标准防护方法…………………………………… 65

含有物质 ………………………… 66

13 外事故应对方案和应急……………………………………………………68

故应 ……………………………… 68

实验 ………………………… 68

14 毒和灭………………………………………………………………71

…………………………………… 71

材料 ……………………………… 71

……………………………… 72

部环 ………………………… 75

物安 ………………………… 76

清除 ………………………… 76

毒和 ……………………………… 76

…………………………………… 78

……………………………… 78

15 染性物质的…………………………………………………………………79

输规 ……………………………… 79

三层 ………………………… 79

除程 ……………………………… 81

第五部 生物技术介绍

16 物安全和重组 DNA ……………………………………………………………85

达系物安 ………………………… 85

体的全考 ………………………… 85

因转毒载 ………………………… 85

转基因动物基因敲除动物 …………………………………………………………… 86

……………………………… 86

饰生危险 ………………………… 86

的考 ……………………………… 87

第六部 化学品、火和电的安全

17 害性化学品 …………………………………………………………………………91

……………………………… 91

的储 ……………………………… 91

相容的一 ………………………… 91

的毒 ……………………………… 91

化学 ……………………………… 92

……………………………… 92


实验室生物安全手册

体和 ……………………………… 92

18 他实验室危害 ………………………………………………………………………94

……………………………… 94

……………………………… 95

…………………………………… 95

……………………………… 95

第七部 安全组织和培训

19 全官全委 ………………

101

全官 ……………………………………

101

全委 ………………………………

101

20 障人 ……………………

103

建筑护保 ………………………………

103

保养 ……………………………………………………………………………

103

21 …………………………

104

第八部 安全清单

22 ………………………… 109

…………………………………… 109

………………………………………… 109

生和员设 ……………………………… 109

……………………………… 110

…………………………………… 110

…………………………………… 110

验室生物安全保……………………………………………………………………… 110

……………………………… 111

体的 ……………………………… 111

体和 ……………………………… 111

……………………………… 112

……………………………… 112

员的 ………………………… 112

仪器 ……………………………… 113

……………………………… 113

和放 ………………………… 114

第九部 参考文献、附录和索引

……………………………… 117


目录

1

…………………………

121

2

作人疫接…………………………

122

3

WHO 作中 ………………………………………………

123

4

…………………………

124

生危器设 ……………………………… 124

5 危害与预防 ……………………………………………………………………127

……………………………… 150


世界卫生组织(WHO)早就认到安全,特别是生物安全,是一个重要的国际性问题,因 此早在 1983 年就出版了《实验室生物安全手册Laboratory Biosafety Manual)第 1 册 鼓励各国接受和执行生物安全的基本概念励针对本国实验室如何安全处理致病微生物制订操作规范1983 年以来已经有许多国家利用该手册所提供的专家指导制订了生物安全操作规 范。该手册的第 2 版于 1993 年出版。

在该手册第 3 WHO 续发挥她在国际生物安全领域的领导作用,阐述新千年所面 临的生物安全和生物安全保障问题该手册第 3 版自始至终强调了工作人员个人责任心的重要作 用,并在下列几个方面增加了新的内容:危险度评估、重组 DNA 的安全利用以及感染性物 质运输世界上昀近发生的事件表明由于蓄意滥用和排放微生物因子和毒素公共卫生正受到新的威胁因此 3 版也介绍了生物安全保障的概念——保护微生物资源免受盗窃遗失或转 移,以免因微生物资源的不适当使用而危及公共卫生。第 3 版中还包 1997 WHO 出版的

《卫生保健实验室安全[1]Safety in Health-Care Laboratories)中有关安全的内容。

WHO实验室生物安全手册》第 3 版对个国家都是有益的参考和指南,它可以帮助制订 并建立微生物学操作规范确保微生物资源的安全进而确保其可用于临床研究和流行病学等 各项工作。


助理总干事传染病事务 世界卫生组织 瑞士,日内瓦


《实验室生物安全手册》第 3 版的完成得益于下列人员的贡献,在此表示衷心的感谢:

Dr W. Emmett Barkley, Howard Hughes Medical Institute, Chevy Chase, MD, USA

Dr Murray L. Cohen, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA, USA

retired

Dr Ingegerd Kallings, Swedish Institute of Infectious Disease Control, Stockholm, Sweden Ms Mary Ellen Kennedy, Consultant in Biosafety, Ashton, Ontario, Canada

Ms Margery Kennett, Victorian Infectious Diseases Reference Laboratory, North Melbourne, Australia retired

Dr Richard Knudsen, Office of Health and Safety, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA, USA

Dr Nicoletta Previsani, Biosafety programme, World Health Organization, Geneva, Switzerland

Dr Jonathan Richmond, Office of Health and Safety, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA, USA retired

Dr Syed A. Sattar, Faculty of Medicine, University of Ottawa, Ottawa, Ontario, Canada

Dr Deborah E. Wilson, Division of Occupational Health and Safety, Office of Research Services, National Institutes of Health, Department of Health and Human Services, Washington, DC, USA

Dr Riccardo Wittek, Institute of Animal Biology, University of Lausanne, Lausanne,

Switzerland

并感谢下列人员所给予的协助:

Ms Maureen Best, Office of Laboratory Security, Health Canada, Ottawa, Canada

Dr Mike Catton, Victorian Infectious Diseases Reference Laboratory, Melbourne, Australia

Dr Shanna Nesby, Office of Health and Safety, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA, USA

Dr Stefan Wagener, Canadian Science Centre for Human and Animal Health, Winnipeg,

Canada

作者和审阅人还要感谢许多专业人员在《实验室生物安全手册》第 1 版和第 2 版以及 1997

WHO 出版的《卫生保健实验室安全》[1]中所做出的原创性贡献。


1

引言

在本手册中,我们根据感染性微生物的相对危害程度制订了危险度等级的划分标准(WHO 的危险度 1 级、2 级、3 级和 4 级)。该危险度等级的划分仅适用于实验室工作。表 1 叙述了不 同的危险度等级。

1 感染微生物的危险度等级分类

危险度 1 级(无或极低的个体和群体危险 不太可能引起人或动物致病的微生物。 危险度 2 级(个体危险中等,群体危险低

病原体能够对人或动物致病,但对实验室工作人员、社区、牲畜或环境不易导致严重危害。 实验室暴露也许会引起严重感染但对感染有有效的预防和治疗措施并且疾病传播的危险有限。

危险度 3 级(个体危险高,群体危险低 病原体通常能引起人或动物的严重疾病,但一般不会发生感染个体向其他个体的传播,并且

对感染有有效的预防和治疗措施。

危险度 4 级(个体和群体的危险均高 病原体通常能引起人或动物的严重疾病,并且很容易发生个体之间的直接或间接传播,对感

染一般没有有效的预防和治疗措施。

实验室可以分为基础实验室——一级生物安全水平基础实验室——二级生物安全水平防 护实验室——三级生物安全水平和昀高防护实验室——四级生物安全水平根据作不同危险度 等级微生物所需的实验室设计特点建筑构造防护设施仪器操作以及操作程序来决定实验室的生物安全水平。表 2 叙述了不同危险度等级相对应的(而非等同的危险度等级微 生物所要求的实验室生物安全水平。


实验室生物安全手册


危险度


2 与微物危险度等级相对应的生物安全水平、操作和设备

生物安全水平 实验室类型 实验室操作 安全设施


1

基础实验

级生物安全水平

基础的教学

GMT

不需要;开放实验台

2

基础实验

级生物安全水平

初级卫生服务;

诊断、研究

GMT 加防护服、生物危

害标志

开放实验,此外需

BSC 用于防护可能生 成的气溶胶

3

防护实验

级生物安全水平

特殊的诊断

在二级生安全防护水

平上增加殊防护服、

BSC 和/或其他所有

实验室工所需要的

进入制度、定向气流

基本设备

4

昀高 实验

四级物安全 水平

危险病

在三级生安全防护水

平上增加锁入口、出 口淋浴、染物品的特

BSC BSC

并穿着正压服双开门 高压灭菌(穿过墙

殊处理

、经过的空气

BSC:生物安全柜;GMT:微生物学操作技术规范(见本手册第 4

每个国家(地区)应该按照危险度等级,并考虑以下因素来制订各自的微生物分类目录:

1、微物的致病性。

2物的式和宿围。能会地人的免、宿主群的 密度和流动、适宜媒介的存在以及环境卫生水平等因素的影响。

3所具效预。这包括接种给予的预防(动 免疫;卫措施,例如食品和饮水的卫生;动物宿主或节肢动物媒介的控制。

4所具效治。这包括免疫后接以及使用生 素、抗病毒药物和化学治疗药物,还应考虑出现耐药菌株的可能性。

在实验室工作中应根据危险度评估结果将微生物因子归入某一生物安全水平在通过危险 度评估工作来确立适当的生物安全水平时要考虑危险度等级以及其他一些因素例如归入危 险度 2 微生物因子,进行安全工作通常需要二级生物安全水平的设施、仪器、操作和规程。 但是如果特定实验需要发生高浓度的气溶胶时由于三级生物安全水平通过对实验工作场所内 气溶胶实施更高级别的防护所以更适于提供所必需的生物安全防护因此在确定所从事特定 工作的生物安全水平时应根据危险度评估结果来进行专业判断而不应单纯根据所使用病原微 生物所属的某一危险度等级来机械地确定所需的实验室生物安全水平(见第 2

3 总了四种不同生物安全水平的防护要求。


1 原则

3 不同物安全水平对设施的要求

生物安全水平

实验室隔离 a

一级

不需要

二级

不需要

三级

需要

四级

需要

房间能够密闭消毒

不需要

不需要

需要

需要

通风

——向内的气流

不需要

昀好有

需要

需要

——通过建筑系统的通风设备

——HEPA 过滤排风

不需要

不需要

昀好有

不需要

需要

需要/不需要 b

需要

需要

双门入口

不需要

不需要

需要

需要

气锁

不需要

不需要

不需要

需要

带淋浴设施的气锁

不需要

不需要

不需要

需要

通过间

不需要

不需要

需要

带淋浴设施的通过间 污水处理

不需要 不需要

不需要 不需要

需要/不需要 c

需要/不需要 c

不需要 需要

高压灭菌器

——现场

不需要

昀好有

需要

需要

——实验室内

不需要

不需要

昀好有

需要

——双门

不需要

不需要

昀好有

需要

生物安全柜

不需要

昀好有

需要

需要

人员安全监控条件 d

不需要

不需要

昀好有

需要

a 在环境与功能上与普通流动环境隔离

b 取决于排风位置(见第 4 章)

c 取决于实验室中所使用的微生物因子

d 例如:观察窗、闭路电视、双向通讯设备

在选安全,要使用体(的实验设、 实验室内从事安全工作所需要的仪器的操作和程序。


第一部

生物安全指



2 微生物危险度评

生物安全工作的核心是危险度评估可以助许多方法来对某一个特定的操作程序或实验进行危险度评估其中昀重要的是专业判断危险度评估应当由那些对所涉及的微生物特性设备 和规程动物模型以及防护设备和设施昀为熟悉的人员来进行实验室主任或项目负责人应当负 责确保进行充分和及时的危险度评估同时也责任与所在机构的安全委员会和生物安全工作人员密切合作以确保有适当的设备和设施来进行相关的研究工作危险度评估一旦进行还应当 考虑收集与危险程度相关的新资料以及来自科学文献的其他相关的新信息以便要时对危险度 评估结果进行定期检查和修订。

进行微生物危险度评估昀有用的工具之一就是列出微生物的危险度等(见第 1 然而 对于一个特定的微生物来讲在进行危险度评估时仅仅参考其危险度等级是远远不够的适当时还应考虑其他一些因素,包括:

1、微物的致病性和感染数量

2、暴的潜在后果

3、自感染途径

4、实室操作所致的其他感染途径(非消化道途径、空气传播、食入)

5、微物在环境中的稳定性

6、所作微生物的浓度和浓缩标本的容量

7、适宿主(人或动物)的存在

8、从物研究和实验室感染报告或临床报告中得到的信息

9、计进行的实验室操作(如超声处理、气溶胶化、离心等)

10会扩大微生物的宿主范围或改变微生物对于已知有效治疗方案敏感性的所有基因技 术(见第 16 章)

11地是否能进行有效的预防或治疗干预。

根据危险度评估过程中所明确的上述信息可以确定所计划开展的研究工作的生物安全水平 级别,选择合适的个体防护装备,并结合其他安全措施制订标准操作规范(standard operating procedureSOP,以确保在昀安全的水平下来开展工作。

信息有限的标本

在获足够的信息以后就能很好地进行上述危险度评估工作但是也有在对相关信了 解较少时进行危险度评估的情(如对于一些现场收集的临床标本或流行病学样品),这些情况下应当谨慎地采取一些较为保守的标本处理方法。

1只要标本取自病人均应当遵循标准防护方[2]并采用隔离防护措(如手套防护服、眼睛保护)。

2、基——处理此类标本时昀低需要二级生物安全水平。

3、标的运送应当遵循国家和/或国际的规章和规定。下列信息可能有助于确定处理这些标本的危险度: 1、病的医学资料


实验室生物安全手册

2、流病学资料(发病率和死亡率资料、可疑的传播途径、其他有关暴发的调查资料)

3、有标本来源地的信息。

在暴发病因不明的疾病时可能应由国家主管部门和∕或 WHO 制订并在万维网上公布适当 的专门指南[如 2003 发生严重急性呼吸综合征Severe Acute Respiratory SyndromeSARS) 时的情况],指导标本应如何运输以及在标本分析时应按何种生物安全水平执行。

危险度评估与遗传修饰微生物

关于危险度评估以及遗传修饰生物genetically modified organismsGMOs的详细讨论见 第 16 章。


3 基础实验室——

一级和二级生物安全水平

手册旨在针对危险度1~4级微生物提出不同等级生物安全水平实验室所应具的昀低 要求的指南和建议虽然其中的一些建议对于某些危险度1级的生物体来说可能没有必要但是 这些建议对于训练工作人员掌握规范(安全)的微生物学操作技术(GMT)来说必要的。

诊断和卫生保健实验(以公共卫生临床或医院为基础的必须设计成二级或二级以上生 物安全水平由于没有一个实验室能够完全地控制其所接收的标本故实验室的操作人员可能会 接触比预期更高危险度的微生物因此在制订生物安全计划和政策时要注意到这种可能性在 某些国家,临床实验室必须经过认可。全世界范围都应采纳并实行生物安全标准防护[2]

关于一级和二级生物安全水平的基础实验室的指南本手册介绍得较为全面详尽因为这 些指南对于各级生物安全实验室都是昀基本的后面介绍(第4章和第 5 三级生物安全水 平的防护实验室和四级生物安全水平的昀高防护实验室所应遵循的指南则是对述指南的修改和补充,用于操作更危险的病原体。

操作规范

本规程中列出了昀基本的实验室操作和程序他们是微生物学操作技术规范的基础在规划 实验室和国家级实验室项目时,可以根据这些规程来制订实验室安全操作的书面程序。

每个实验室都应该采“安全手册”或操作手册”,其中定义了已知的和潜在的危害并 规定了特殊的操作程序来避免或尽量减小这种危害规范微生物学操作技术是实验室安全的基础而专门的实验设备仅仅是一种补充绝不能替代正确的操作规范下面列出了一些昀重要的 概念。

进入规定

1、在理危险度 2 级或更高危险度级别的微生物时,在实验室门上应标有国际通用的生物 危害警告标志(图 1)。

2、只经批准的人员方可进入实验室工作区域。

3、实室的门应保持关闭。

4、儿不应被批准或允许进入实验室工作区域。

5、进动物房应当经过特别批准。

6、与验室工作无关的动物不得带入实验室。

人员防护

1、在验室工作时,任何时候都必须穿着连体衣、隔离服或工作服。

2行可或意到血液以具有染性或感染性物 的操作时,应戴上合适的手套。手套用完后,应先消毒再摘除,随后必须洗手。


实验室生物安全手册

3、在理完感染性实验材料和动物后,以及在离开实验室工作区域前,都必须洗手。

4防止面部溅物物或外线伤害戴安全眼、 面罩(面具)或其他防护设备。

5穿着防护实验如去咖啡公室馆、员工息 室和卫生间)。

6、不在实验室内穿露脚趾的鞋子。

7、禁在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理隐形眼镜。

8、禁在实验室工作区域储存食品和饮料。

9、在验室内用过的防护服不得和日常服装放在同一柜子内。

1 张贴实验室门上的生物危害警告标志

操作规范

1、严用口吸移液管。

2、严将实验材料置于口内。严禁舔标签。

3、所的技术操作要按尽量减少气溶胶和微小液滴形成的方式来进行。

4制使注射注射了进外注取实体液,皮注 射针头和注射器不能用于替代移液管或用作其他用途。

5溢出以及可能感染时,实验报告。实室 应保存这些事件或事故的书面报告。

6、必制订关于如何处理溢出物的书面操作程序,并予以遵守执行。


3 实验室——和二级生物安全水平

7的液放到水管必须染(学或方法)。据 所处理的微生物因子的危险度评估结果,可能需要准备污水处理系统。

8、需带出实验室的手写文件必须保证在实验室内没有受到污染。 实验室工作区 1、实室应保持清洁整齐,严禁摆放和实验无关的物品。

2发生具有潜在危害性的材料溢出以及在每天工作结束之后都必须清除工作台面的污染。

3、所受到污染的材料、标本和培养物在废弃或清洁再利用之前,必须清除污染。

4、在行包装和运输时必须遵循国家和∕或国际的相关规定。

5、如窗户可以打开,则应安装防止节肢动物进入的纱窗。

生物安全管理

1室主实验负责)负和采安全划以及安或 操作手册。

2、实室主管(向实验室主任汇报)应当保证提供常规的实验室安全培训。

3生物验室危害验室同时们阅安全或操手 册并遵循标准的操作和规程实验室主管应当确保所有实验室人员都了解这些要求实验室内应备有可供取阅的安全或操作手册。

4、应制订节肢动物和啮齿动物的控制方案。

5如有必要应为所有实验室人员提供适的医评估监测和并应善保相应 医学录。

实验室的设计和设施

在设实验室和安排某些类型的实验工作时对于那些能造问题要加注,括:

1、气胶的形成

2、处大容量和∕或高浓度微生物

3、仪设备过度拥挤和过多

4、啮齿动物和节肢动物的侵扰

5、未允许人员进入实验室

6、工流程:一些特殊标本和试剂的使用。

一级和二级生物安全水平实验室的设计实例分别见图 2 和图 3


实验室生物安全手册

2 典型一级生物安全水平实验(图片由 CUH2APrincetonNJUSA 提供)

设计特征

1、必为实验室安全运行、清洁和维护提供足够的空间。

2室墙花板应当易清渗漏学品剂的腐蚀地 板应当防滑。

3、实台面应是防水的,并可耐毒剂、、碱溶剂热度

4、应证实验室内所有活动的照明,避免不必要的反光和闪光。

5室器坚固在实生物和其之间面要保证足 够的空间以便进行清洁。

6有足存空放随使的物免实走廊。在实验的 工作区外还应当提供另外的可长期使用的储存间。

7、应为安全操作及储存溶剂、放射性物质、压缩气体和液化气提供足够的空间和设施。

8、在验室的工作区外应当有存放外衣和私人物品的设施。

9、在验室的工作区外应当有进食、饮水和休息的场所。

10个实验室都应有洗手池,并昀好安装在出口处,尽可能用自来水。


3 实验室——和二级生物安全水平

11验室的门应有可视窗,并达到适当的防火等级,昀好能自动关闭。

12级生物安全水平时,应在靠近实验室的位置配备高压灭菌器或其他清除污染的工具。

13全系统应当包括消防、应急供电、应急淋浴以及洗眼设施。

14当配备具有适当装备并易于进入的急救区或急救室(见附录 1)。

15设计新的设施时应当考虑设置机械通风系统以使空气向内单向流动如果没有机 械通风系统,那么实验室窗户应当能够打开,同时应安装防虫纱窗。

16须为实验室提供可靠和高质量的水要保证实验室水源和饮用水源的供应管道之间没 有交叉连接。应当安装防止逆流装置来保护公共饮水系统。

17有可靠和充足的电力供应和应急照明以保证人员安全离开实验室备用发电机对于保证重要设备的正常运转(如培养箱、生物安全柜、冰柜等)以及动物笼具的通风都是必要的。

18有可靠和充足的燃气供应。供气设施必须得到良好维护。

19验室和动物房偶尔会成为某些人恶意破坏的目标必须考虑物理和防火安全措施必 须使用坚固的门、纱窗以及门禁系统。适当时还应使用其他措施来加强安全保障(见第 9 )。

实验室设备

处理生物安全危害时使用安全设施并结合规范的操作将有助于降低危险本节阐述了适用 于所有生物安全实验室的相关设备的基本原则有关高级别生物安全实验室设备的要求将在相关 章节中阐述。

实验室主任应咨询生物安全官员和安全委员(如果有),确保配备足量的设备并能正确 使用。选择设备时应符合一些基本原则,即:

1、在计上应能阻止或限制操作人员与感染性物质间的接触

2、建材料应防水、耐腐蚀并符合结构要求

3、设装配后应无毛刺、锐角以及易松动的部件

4的设造与便于易于清洁污染质量检验应 尽量避免使用玻璃及其他易碎的物品。

需要详细咨询设备的性能和结构规格,以确保设施具备必要的安全特性(参见第 10 和第 11

章)。


实验室生物安全手册

3 典型二级生物安全水平实验(图片由 CUH2APrincetonNJUSA 供)。在生物安全柜中进行可能发生气溶胶的操作程序。 门保持关并贴上适的危险标。潜在被染的废弃同普通废弃物隔开。

基本生物安全设备

1、移辅助——避免用口吸的方式移液。有不同设计的多种产品可供使用。

2、生安全柜,在以下情况使用:

—— 处理感染性物质如果使用密封的安全离心杯并在生物安全柜内装样取样则 这类材料可在开放实验室离心

—— 空气传播感染的危险增大时

—— 进行极有可能产生气溶胶的操作(包括离心研磨混匀剧烈摇动超声破碎、 打开内部压力和周围环境压力不同的盛放有感染性物质的容器动物鼻腔接种以及 从动物或卵胚采集感染性组织)。

3、一性塑料接种环,也可在生物安全柜内使用电加热接种环,以减少生成气溶胶。

4、螺盖试管及瓶子。


3 实验室——和二级生物安全水平

5、用清除感染性材料污染的高压灭菌器或其他适当工具。

6、一性巴斯德塑料移液管,尽量避免使用玻璃制品。

7入使像高器和全柜必须方法收。应参生 产商的说明书定期检测(见第 7 )。

健康和医学监测

主管构有责任通过实验室主任来确保实验室全体工作人员接受适当的健康监测监测的目 的是监控职业获得性疾病。为达到这些目的,应进行如下工作:

1、根需要提供主动或被动免疫(见附录 2

2、促实验室感染的早期检测

3、应止高度易感人群(如孕妇或免疫损伤人员)在高危险实验室中工作

4、提有效的个体防护装备和方法。

在一级生物安全水平操作微物的实验室工作人员的监测指南

历史证据表明级生物安全水平操作的微生物不太可能引起人类疾病或兽医学意义的动物疾病但理想的做法是所有实验室工作人员应进行上岗前的体检并记录其病史疾病和实 验室意外事故应迅速报告,所有工作人员都应意识到应用规范的实验室操作技术的重要性。

在二级生物安全水平操作微物的实验室工作人员的监测指南

1、必有录用前或上岗前的体检。记录个人病史,并进行一次有目的的职业健康评估。

2、实室管理人员要保存工作人员的疾病和缺勤记录。

3期妇道某物(病毒业暴出生危害。保胎 儿的正确措施因妇女可能接触的微生物而异。

培训

误和的操大地采取措施室人护效。因悉如与控室危安全工作预防感染的关 键基于行安方面培训必要的有效首先 于实理者应确全的操作融合人员培训中施方训是人员训的成部工作绍生操作和实 室操指南包括册或如签的方法保工并理 了这规程实验在对作人规范室操培训键作用全官帮助员培制教案( 21

员培训的内容应始终包括如何采用安全的方法来进行下列所有实验室工作人员会经常 遇到的高危操作,包括:

1危险胶产如使环、线种琼、移作涂片、开 培养物、采集血液/血清标本、离心等

2、食危险,如处理标本、涂片以及培养物

3、在使用注射器和针头时刺伤皮肤的危险

4、处动物时被咬伤、抓伤

5、处血液以及其他有潜在病理学危害的材料

6、感性材料的清除污染和处理。


实验室生物安全手册

废弃物处理

废弃物是指将要丢弃的所有物品。 在实验室内废弃物昀终的处理方式与其污染被清除的情况是紧密相关的对于日常用品而

很少有污染材料需要真正清除出实验室或销毁大多数的玻璃器皿仪器以及实验服都可以

重复或再使用废弃物处理的首要原则是所有感染性材料必须在实验室内清除污染高压灭菌或 焚烧。

用以处理潜在感染性微生物或动物组织的所有的实验室物品丢弃前应考虑的主要问题有:

1、是已采取规定程序对这些物品进行了有效的清除污染或消毒?

2没有他们是否以规定的方式包裹以便地焚或运他有施的处理?

3已清的物是否接参的人在设能接触到弃 物的人员造成任何潜在的生物学或其他方面的危害?

清除污染

高压蒸汽灭菌是清除污染时的首选方法需要清除污染并丢弃的物品应装在容器(如根据 内容需要压灭或焚用不标记高压塑料袋可 采用其他可以除去和/或杀灭微生物的替代方法(详见第 14

污染性材料和废弃物的处理和丢弃程序

要对染性物质及其包装物进行鉴别并分别进行处理相关工作要遵守国家和国际规定废 弃物可以分成以下几类:

1、可复或再使用,或按普通“家庭”废弃物丢弃的非污染(非感染性)废弃物

2污染性)锐器用针术刀刀子及碎玻些废收 集在带盖的不易刺破的容器内,并按感染性物质处理

3、通高压灭菌和清洗来清除污染后重复或再使用的污染材料

4、高灭菌后丢弃的污染材料

5、直焚烧的污染材料。

锐器

皮下注射针头用过后不应再重复使用,包括不能从注射器上取下、回套针头护套、截断等,应将其完整地置于盛放锐器的一次性容器中独使用或带针头使用的一次性注射器应放在盛放 锐器的一次性容器内焚烧,如需要可先高压灭菌。

盛放锐器的一次性容器必须是不易刺破的而且不能将容器装得过满当达到容量的四分之 三时应将其放“感染性废弃物的容器中进行焚烧如果实验室规程需要可以先进行高压 灭菌处理。盛放锐器的一次性容器绝对不能丢弃于垃圾场。

高压灭菌后重复使用的污染(有潜在感染性)材料

任何高压灭菌后复使用的染(有潜感染性)料不事先清洗必要、 修复必须在高压灭菌或消毒后进行。


3 实验室——和二级生物安全水平

废弃的污染(有潜在感染性)材料

除了锐器按上面的方法进行处理以外所有其他污潜在感丢弃防渗(如颜色标记的可高压灭菌塑料袋中高压灭菌高压灭菌后物品可以放在 运输容器中运送至焚烧炉如果可能即使在清除污染后卫生保健单位的废弃物也不应丢弃到 垃圾场。果实验室配有焚烧,则可以免去压灭菌:染材料应在指定的器(如有 色标子)运送炉中重复使用的运输容器应是防渗漏的,有密闭的盖 子。这些容器在送回实验室再次使用前,应进行消毒清洁。

应在每个工作台上放置盛放废弃物的容器盘子或广口瓶昀好是不易破碎的容(如塑料 制品。当使用消毒剂,应使废物充分接消毒剂(即不能据所使用消 剂的(见 14 )保持适当接触时间。盛放废弃物的容器在重新使用前应高压灭菌并清洗。

须得到公共卫生、环保部门以及实验室生物安全官员的批准 14 “焚

化学品、火、电、辐射以及仪器设备安全

化学品电或辐射事故可以间接导致病原微生物屏障系统的破坏因此所有微生物实 验室在这些方面必须坚持很高的安全标准。国家或地方的主管部门通常会制订相关的规和条 必要时可以从他里寻本手的第 17 18 更详细地讨 论化学品、火、电及辐射的危害。

有关安全设施的其他资料参见第 11 章。


4 防护实验室——

三级生物安全水平

三级生物安全水平的防护实验室是为处理危险度 3 微生物和大容量或高浓度的具有

气溶胶扩散危险的危险度 2 级微物的工作而设计的生物安全水平需要比一级和二级生物 安全水平的基础实验室(见第3章)更严格的操作和安全程序。

中所指标级和物安的基室的上所的部 因此物安的防室首应用验室指标主要部分和为:

1、操规范

2、实室设计和设施

3、健和医学监测。

三级生物安全实验室应在国家或其他有关的卫生主管部门登记或列入名单。

操作规范

除下修改以外,应采用一级和二级生物安全水平的基础实验室的操作规范:

1张贴在实验室入口门上的国际生物危害警告标(见图 1明生物安全级别以及管理 实验室出入的负责人姓名,并说明进入该区域的所有特殊条件,如免疫接种状况。

2实验室防护服必须是正面不开口的或反背式的隔离衣清洁服连体服带帽的隔离衣, 必要时穿着鞋套或专用鞋前系扣式的标准实验服不适用因为不能完全罩住前臂实验室防护 服不能在实验室外穿着且必须在清除污染后再清洗当操作某些微生物因子(如农业或动物 感染性因子),可以允许脱下日常服装换上专用的实验服。

3各种潜在感染性物质的操作均必须在生物安全柜或其他基本防护设参见第 10 章) 中进行。

4有些实验室操作或在进行感染了某些病原体的动物操作时必须配备呼吸防护装(见 第 11 章)。

实验室的设计和设施

除下列修改以外,应采用一级和二级生物安全水平的基础实验室的设计和设施:

1室应建筑活动隔开可将置于盲端,或隔 离区和隔离门或经缓冲(即双门通过间或二级生物安全水平的基础实验室进入缓冲间是一个在实验室和邻近空间保持压差的专门区域,其中应设有分别放置洁净衣服和脏衣服的设施, 而且也可能需要有淋浴设施。

2间的动关锁,某一有一开着当配备能碎 的面板供紧急撤离时使用。

3室的墙面地面和天花板必须防水并易于清的开管道过处


4 实验室——生物安全水平

必须密封便于清除房间污染。

4、为便于清除污染,实验室应密封。需建造空气管道通风系统以进行气体消毒。

5、窗应关闭、密封、防碎。

6、在个出口附近安装不需用手控制的洗手池。

7建立可使空气定流动可控应安直观便工作随时验室正确气流测系也可报系

8建通风系时,应保从三级生安全实验内所排出空气不会流至该建物内的其他区域空气经高效空气过滤high-efficiency particulate air filtersHEPA 过滤、 更新后,可在实验室内再循环使用。当实验室空气(来自生物安全柜的除外)排出到建筑,必须在离该建筑进气口的方扩散。据所操作微生物因不同,空可以经 HEPA 过滤器过滤后排放。可以安装取暖、通风和空调HVAC)控制系统来防止实验室续正考虑听警向工 HVAC 统故障号。

9、所 HEPA 过滤器必须安装成可以进行气体消毒和检测的方式。

10安全柜的安装位置应远离人员活动区且避开门和通风系统的交叉(见第 10

11Ⅰ级和Ⅱ级生物安全柜(见第 10 )排出的空气,在通过 HEPA 器后排出时, 必须避免干扰安全柜的空气平衡以及建筑物排风系统。

12护实验室中应配置用于污染废弃物消毒的高压灭菌器如果感染性废弃物需运出实验 室处理,则必须根据国家或国际的相应规定,密封于不易破裂的、防渗漏的容器中。

13管必防逆。真应采液体的防 HEPA 过滤 或相进行备用也应阀和进行护。

14级生物安全水平的防护实验室,其设施设计和操作规范应予存档。三级生物安全水平实验室设计的实例见图 4

实验室设备

在三级生物安全实验择设括生 10 与二 生物平的验室三级安全所有和感性物质有关的操作均需 在生物安全柜或其他基本防护设施中进行像离心机等需要另外配置防护用附(如安全离心桶 或防护转子的仪器需要进行特别考虑有些离心机或其他设(如用于感染性细胞的分选仪器) 可能需要在局部另外安装带有 HEPA 过滤器的排风系统以达到有效的防护效果。

健康和医学监测

一级和二级生物安全水平的基础实验室的健康和医学监测的目的也适用于三级生物安全水平的 护实室,需作下修

1三级全水护实工作人员制进检查。内包 括一份详细的病史记录和针对具体职业的体检报告。

2、临检查合格后,给受检者配发一个医疗联系卡(如图 5 ),说明他或她受雇于三 级生物安全水平的防护实验室卡片上应有持卡者的照片卡片应制成钱包大小并由持卡者随 身携带所填写的联系人姓名需经所在机构同意应包括实验室主任医学顾问和/或生物安全官员。


实验室生物安全手册

4 典型三级生物安全水平实验(图片由 CUH2APrincetonNJUSA 提 供实验与公共通道分开并通过缓冲(双门入口或二级生物安全水平的基础 实验室或气锁室进入处理废弃物前在实验室内先进行高压灭菌以清除污染。 应有非手的水槽。成向内气而且涉及染性材料全部工作在生物全柜中进行。

4 实验室——生物安全水平

A、卡片正面

疾病监测卡 持卡者照片

姓名 致工作人员:

由本此卡出现释的症时,将

该卡医生所列序通人员中的 某一位。

医师 单位电话:

家庭电话:

医师 单位电话:

家庭电话:

B、卡片反面 致医生:

持该 作环在致病性病毒次体、原或寄当出现不能解热病请与系,该工作人员可能接触的致病因子的相关信息。

实验室名称 地址

电话:

5 医疗系卡的推荐样式

5 昀高防护实验室——

四级生物安全水平

安全昀高验室行与 4 相关而设这种 验室和投使询有似设的机构生物平的昀实验作应或其的卫机构下进列资为介性材关四安全验室实质,应 WHO 的生规划 1 相关料。

操作规范

除下列修改以外,应采用三级生物安全水平的操作规范:

1双人,任下严人单验室。这防护服型级 生物安全水平实验室中工作时尤其重要。

2、在入实验室之前以及离开实验室时,要求更换全部衣服和鞋子。

3、工人员要接受人员受伤或疾病状态下紧急撤离程序的培训。

4级生水平防护中的员与外面人员之间必 须建立常规情况和紧急情况下的联系方法。

实验室的设计和设施

安全防护的要用于 物安 的昀 实验 但 需 增加

1、基防护。配备由下列之一或几种组合而成的、有效的基本防护系统。

—— Ⅲ级生物安全柜型实验室在进入有Ⅲ级生物安全柜的房(安全柜房间 先通过至少有两道门的通道在该类实验室结构中由Ⅲ级生物安全柜来提供基本 防护实验室必须配备带有内外更衣间的个人淋浴室对于不能从更衣室携带进出 安全柜型实验室的材料物品应通过双门结构的高压灭菌器或熏蒸室送入只有 在外门安全锁闭后实验室内的工作人员才可以打开内门取出物品高压灭菌器或熏蒸室的门采用互锁结构除非高压灭菌器运行了一个灭菌循环或已清除熏蒸室 的污染,否则外门不能打开(见第 10 章)。

—— 防护服型实验室自带呼吸设备的防护服型实验室在设计和设施上与配备Ⅲ级生 物安全柜的四级生物安全水平实验室有明显不同防护服型实验室的房间布局设计 成人员可以由更衣室和清洁区直接进入操作感染性物质的区域必须配备清除防护 服污染的淋浴室以供人员离开实验室时使用还需另外配备有内外更衣室的独立

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1 Biosafety programme, Department of Communicable Disease Surveillance and Response, World Health Organization, 20 Avenue Appia, 1211 Geneva 27, Switzerland (http://www.who.int/csr/).


的个人淋浴室进入验室的人员需穿着一套正压的气经 HEPA 过滤的连防护服防护的空气必须由双倍用气量的独立气源系统供给以备紧急情况下使。 人员通过装有密封门的气锁室进入防护服型实验室必须在防护服型实验室内工作的人员安装适当的报警系统以备发生机械系统或空气供给故障时使(见第 10 章)。

2、进控制。生物安全水平的昀高防护实验室必须位于独立的建筑内,或是在一个 全可靠的建筑中明确划分出的区域内人员或物品的进出必须经过气锁室或通过系统人员进入 时,需更换全部衣服,而离开时,在穿上自己的日常服装前应淋浴。

3系统控制。设施内应保持负压。供风和排风均需经 HEPA 过滤。Ⅲ级安全柜型实验 室和防护服型实验室的通风系统有显著差异:

—— Ⅲ级安全柜型实验室通入Ⅲ级生物安全柜的气体可以来自室内并经过安装在生 物安全柜上的 HEPA 过滤器由供风系统直接提供从Ⅲ级生物安全柜内出 的气体在排到室外前需经两个 HEPA 过滤器过滤工作中安全柜内相对于周围环 境应始终保持负压。应为安全柜型实验室安装专用的直排式通风系统。

—— 防护服型实验室需要配备专用的房间供风和排风系统通风系统中的供风和排风 部分相互平衡,以在实验室内产生由昀小危险区流向昀大潜在危险区的定向气流。应配备更强的排风扇以确保设施内始终处于负压必须监测防护服型实验室内部 不同区域之间及实验室与毗连区域间的压力差必须监测通风系统中供风和排风部 分的气流,同时安装适宜的控制系统,以防止防护服型实验室压力上升。供风经 HEPA 后输送至防护服型实验室用于清除污染的浴室以及用于清除污染的气 锁室或传递室内防护服型实验室的排风必须通过两个串连的 HEPA 过滤器过滤后 释放至室外或者在过两个 HEPA 过滤器过滤后循环使用但仅于防护服实 验室内在任何情况下四级生物安全水平实验室所排出的气体均不能循环至其他 区域如果选择在防护服型实验室内循环使用空气那么在操作中要极度谨慎必 须要考虑所进行研究的类型在防护服型实验室中所使用的仪器化学品及其他材 料,以及研究中所使用动物的种类。

所有的 HEPA 器必须每年进行检查、认证。HEPA 器支的设使过滤在拆除 可以除污染以将装入封的气密容器随后菌和∕处理。

4、污水的净化消毒。所有源防护服型验室、用清除污染传递间、于清除污 浴室或Ⅲ级生物安全柜的污水在昀终排往下水道之前必须经过净化消毒处理首选加热消毒

(高压灭菌)法。污水在排出前,还需将 pH 值调至中性。个人淋浴室和卫生间的污水可以不经 任何处理直接排到下水道中。

5物和用过物品的灭实验室内必须配备双递型高灭菌器于不能进 汽灭,应提供其他清除污染的方法。

6、必要有供标本、实验用品以及动物进入的气锁

7必须应急用供线路。

8必须安全护排水由于型或型四安全设计结构高度

出此的代片。

生物平实工作复杂性独制的工手册并在培


实验室生物安全手册

行检外还应急 13 方案过程国家的卫机构作。也要防、定点院等急服


6 实验动物设

因实或诊断目的而使用动物的实验人员要有道德上的职责尽量照顾好动物应尽量避免给动物带来不必要的痛苦或伤害。同时必须为动物提供舒适、卫生的笼具和足量、卫生的食物、 饮水。实验结束时,必须以仁慈方式处死动物。

由于安全保障方面的原因动物室应是一个独立分开的部分如果它与实验室毗连则设计 上应当同实验室的公共部分分开,并便于清除污染与杀灭虫害。

动物设施的防护水平:实验操作和安全设备汇总

危险度等级

防护水平

实验室操作和安全设施

1

ABSL-1

限制出入,穿戴防护服和手套

2

ABSL-2

ABSL-1 的操作加危险警告标志可产生气溶胶的操作应使用Ⅰ级 或Ⅱ级 BSC。废弃物和饲养笼具在清洗前先清除污染。

3

ABSL-3

ABSL-2 的操作加:进入控制。所有操作均在 BSC 内进行,并穿着 特殊防护服。

4

ABSL-4

ABSL-3 的操作加:严格限制出入。进入前更衣。配备Ⅲ级 BSC 正压防护服。离开时淋浴。所有废弃物在清除出设施前需先清除污 染。

ABSL:动物设施生物安全水平;BSC:生物安全柜

实验室一样,动物设施主要根据所研究微生物的危险度评估结果和危险度等级名为一 级、二级、三级或四级动物设施生物安全水平。

关于动物实验室中使用的微生物,需要考虑的因素包括:

1、正传播途径

2、使的容量和浓度

3、接途径

4、能和以何种途径被排出。

关于动物实验室中使用的动物,需要考虑的因素包括:

1、动的自然特性,亦即动物的攻击性和抓咬倾向性

2、自存在的体内外寄生虫

3、易的动物疾病

4、播过敏原的可能性。

和对验室的要一样,根动物生物全等级,在设计设备措施的严也逐 4 并汇关的其所具有,即等级 准中等级


实验室生物安全手册

动物设——一级生物安全水平

安全动物用于过检疫的验动长类这类向国机构以及种了 1 的动求应微生 学操GMT动物设的主制订作和养场循的和方工作订适学监,制行安作手

动物设——二级生物安全水平

二级生物安全水平的动物设施适用于专门接种了危险度 2 级微物的动物要进行下列安全防护:

1、必符合一级生物安全水平动物设施的所有要求。

2、在及其他适宜的地方张贴生物危害警告标志(见图 1)。

3、设的设计必须易于清洁和管理。

4、门须向内开,并可以自动关闭。

5、要适宜的温度、通风和照明。

6采用风,的方向内的空到室得在建筑内 循环使用。

7、授人员方可进入。

8、仅纳实验用动物。

9、应订节肢动物和啮齿类动物的控制方案。

10有窗户必须是安全抗击碎的如果窗户可以打开则必须安装防节肢动物的纱网。

11使用后,工作表面应用有效的消毒剂来清除污染(见第 14 )。

12能产生气溶胶的工作必须使用生物安全(Ⅰ级或Ⅱ级或隔离箱隔离箱要带有专 用的供气和经 HEPA 过滤的排气装置。

13物设施的现场或附近备有高压灭菌器。

14理动物的垫料时必须尽量减少气溶胶和灰尘的产生。

15有废料和垫料在丢弃前必须先清除污染。

16可能限制锐利器具的使用锐器应始终收集在带盖的防刺破容器中并按感染性物质 处理。

17行高压灭菌、焚烧的物品应装在密闭容器中安全运输。

18物笼具在使用后必须清除污染。

19物尸体必须焚烧。

20设施内必须穿着防护服和其他装备,离去时脱下。

21须有洗手设施。人员离开动物设施前必须洗手。

22发生伤害,无论程度轻重,必须进行适当的治疗,且要报告并记录。

23止在设施内进食、饮水、吸烟和化妆。

24有人员必须接受适当的培训。


6 动物设施

动物设——三级生物安全水平

三级物安全水平的动物设施适用于专门接种了危险度 3 级微物的动物或根据危险度评 估结果来确定所有系统操作和规程每年都需要重新检查及认证需要执行下列安全防护措施:

1、必符合一级和二级生物安全水平动物设施的所有要求。

2、严控制进入。

3、设必须通过由双门入口构成的缓冲间,以便与实验室的其他部分及动物房隔开。

4、缓间内必须配备洗手设施。

5、缓间内必须配备淋浴设施。

6采用风,连续通过间。气排外前,必HEPA ,不得循环使用。系统的设计必须可以防止意外逆流及动物室内出现正压。

7在生害的内,方便安装菌器性废弃物移 至设施的其他区域前需高压灭菌。

8、现应当就近备有焚烧炉,或由主管部门另作安排。

9、感危险度 3 微生物的动物的饲养笼具,必须置于隔离器或在笼具后装有通风系统排风口的房间中。

10料应尽量无尘。

11有的防护服在洗烫前必须先清除污染。

12户必须关闭、封严、抗破损。

13作人员应进行适当的免疫接种。

动物设——四级生物安全水平

正常况下此类设施中的工作与四级生物安全水平的昀高防护实验室中的工作有关国家 和地方的规章和规定必须协调以同时适用于这两种实验室在防护服型实验室内工作时除了这 里所说明的要求外,还应符合其他规定(见第 5

1、必符合一级、二级及三级生物安全水平动物设施的所有要求。

2、严限制进入,只有主任指定的工作人员方有权进入。

3、禁单独工作,必须遵守双人工作制度。

4人员经接高水生物,熟作中的危险以必 要的预防措施。

5、饲感染危险度 4 级微生因子的动物的区域,必须遵照四级生物安全水平的昀高防护实验室的防护标准。

6通过冲室入设锁缓洁净制侧须由更衣、 淋浴室分开。

7设施作人脱下装,专用。工后,必须下 防护服进行高压灭菌,淋浴后再离去。

8、设必须安装带有 HEPA 过滤器的排风系统进行通风,以确保室内负压(向内气流)。

9、通系统必须能防止气体逆流及出现正压。

10须配备双门高压灭菌器来传递物品,洁净端在防护室外的房间内。


实验室生物安全手册

11须配备传递气锁舱以供传递不能高压灭菌的物品,其洁净端在防护室外的房间内。

12进行感染危险度 4 生物的动物的操作时均必须在四级生物安全水平的昀高防护 实验室中进行。

13有动物必须饲养在隔离器内。

14有垫料和废弃物在清除出设施前必须经高压灭菌处理。

15作人员必须进行医学监测。

无脊椎动物

和脊椎动物一样物设施的生物安全等级由所研究的或自然存在的微生物的危险度等级决定或根据危险度评估结果来确定对于某些节肢动物尤其是飞行昆虫必须另外采取如下的 预防措施:

1已感和未染的脊椎物应开房饲养。

2、房能密闭进行熏蒸消毒。

3、备喷雾型杀虫剂。

4、应备制冷设施,以备必要时降低无脊椎动物的活动性。

5、进设施的缓冲间内应安装捕虫器,并在门上安装防节肢动物的纱网。

6、所通风管道和可开启的窗户均要安装防节肢动物的纱网。

7、水和排水管上的存水弯管内不能干涸。

8、所废弃物应高压灭菌,因为对于某些无脊椎动物,任何消毒剂均不能将其杀死。

9、对飞、爬、跳跃的节肢动物的幼虫和成虫应坚持计数检查。

10置蜱螨的容器应竖立置于油碟中。

11感染或可能感染的飞行昆虫必须收集在有双层网的笼子中。

12须在生物安全柜或隔离箱中操作已感染或可能感染的节肢动物。

13感染或可能感染的节肢动物可以在冷却盘上操作。详细资料见参考文献 36


7 实验室∕动物设施试运行指

实验室∕动物设施的试运行可以定义为对已经完成安装检查功能测试的指定实验室的结构部分系统和∕或系统的组成部分所进行的系统性检查然后形成文件证明其符合国家或国际标准试运行合格的要求根据每一个建筑系统的设计标准和设计功能的不同而不同换句话 说那些指定达到14级不同生物安全水平的实验室其试运行要求也可能各有不同并逐渐变 得复杂地质断层带以及极端热冷或潮湿等地理和气候条件也可能影响实验室的设计并因此 影响试运行要求在完成试运行以后有关结构部分和支持系统应能满足可正常预期的各种不 同的操作条件和故障模式,这样方能得到批准。

应尽早确立试运行程序和接受标准昀好是在建造或改建计划的规划阶段就确立好在计划 早期确认了试运行程序后建筑师工程师安全和卫生人员以及实验室昀终用户就能了解特定 实验室的性能要求并为实验室和∕或动物设施的性能指标设定统一的期望值试运行程序为实 验室所在机构和周围社区提供一个高度可信的保证,即实验室的结构、电力、机械和管道系统、防护和净化系统以及安全保障和警报系统将按设计要求运行可以确对特定实验室或动物设施 中所操作的所有潜在危险性微生物提供有效的防护。

试运行工作通常在实验室或动物设施的项目计划阶段就开始穿于整个施工过程和随后的保修期保修期通常在设施起用后持续一年一般推荐那些与参与该实验室设施的建筑和设计 的建筑工程公司无关的单位作为试运行机构。试运行机构作为实验室建造或改建单位的支持者,可以认为是设计队伍中的成员他们必须在计划早期参与工作某些情况下实验室所在单位也可以担任自己实验室的试运行机构。对于更为复杂的实验室设施(三级或四级生物安全水平), 实验室所在机构可能希望从外面聘请那些对试运行复杂生物安全实验室和动物设施方具有成 功经验的试运行机构在选择使用独立的试运行机构时实验室所在机构仍然可以作为试运行队 伍的一部分除了试运行机构以外实验室所在机构的安全官员项目官员计划经理以及操作 和维护工作人员代表也推荐作为试运行队伍中的成员。

下列各项虽然并非实验室系统和组成部分的全面内容但在根据改建或建造的实验设施的防 护水平来进行功能测试时这些内容可能包括在该试运行计划中明显地实际的试运行计划将 反映出正在计划中的实验室的复杂性。

1、包与远程监视和控制点相连接的建筑自动化系统

2、电监控和检测系统

3、电安全锁和接近装置阅读器

4、暖、通风(送风和排风)和空调HVAC)系统

5、高空气HEPA)过滤系统

6HEPA净化系统

7HVAC和排风系统控制以及互锁控制

8、密隔离调节阀

9、实室制冷系统

10炉和蒸汽系统


实验室生物安全手册

11情探测、扑灭和警报系统

12政水回流阻止器

13处理系统(亦即反渗透蒸馏水)

14水处理和中和系统

15道排水引流系统

16学除污系统

17学实验室供气系统

18吸供气系统

19器设备供气系统

20验室和支持区域不同级别压力差的验证

21域网LAN)和计算机数据系统

22常电源系统

23急电源系统

24间断电源系统

25急照明系统

26明固定装置的穿透密封

27和机械设施的穿透密封

28话系统

29锁门互锁控制

30密门密封

31户和可视面板的穿透密封

32障传递口穿透

33构完整性查核:混凝土地板、墙及天花板

34离涂层的查核:地板、墙及天花板

35BSL4防护外壳加压和隔离功能

36物安全柜

37压灭菌器

38氮系统和警报器

39水监测系统(例如流入防护区)

40化淋浴和化学添加剂系统

41具的洗涤和中和系统

42弃物处理。


8 实验室∕动物设施认证指

实验室是一个复杂而动态的环境当今的物医学研究和临床实验室必须能够快速适应不断发展的公共卫生需要和压力一个典型的例子为实验室需要调整重点以应付新出现的或重新出 现的传染性疾病的挑战为了确保这些动态实验室的环境能适应并维持在适当和安全的状态所 有生物学研究实验室和临床实验室都应该定期进行“认证”。实验室认证工作有助于确保:

1、采了正确的工程控制并能按设计正常运行

2、适的现场和规章的专门管理控制到位

3、个防护装备能满足所进行工作的要求

4、充考虑对废弃物和已用过材料的清除污染,适当的废弃物管理程序到位

5、包物理、电和化学安全的常规实验室安全程序到位。

认证室试作(第7在一方面同。认证是对验 室内部的所有安全特征和过(工程控制个体防护装备以及管理控制进行系统性检查对生物安全操作和规程也要进行检查实验室认证应定期进行是一种不断进行的保证质量和安全的 活动。

受过充分培训的安全和卫生或生物安全专业人员可以进行实验室认证工作验室所在机构 也可以雇用一些人员他们有认证程序所需要的熟练的审核考察和检(这些名词术语可互用) 的技能。但实验室所在机构也可以考虑或可能被要求让第三方来进行认证工作。

生物医学研究实验室机构和临床实验室机构可以制订各种检查表格以利于保认证过程的一致性这些表格应该有足够的灵活性以适应不同实验室结构和程序上的差异这些实验室需 要在同一时间在实验室所在机构内部用统一的方法进行各种类型的工作必须注意的是只有经 过适当培训的工作人员才允许使用这些表格使这些表格不会用来替代可靠的生物安全专业评估。表57列出了这一些表格的例子。

检查结果应与实验室人员和管理者一起讨论对于在检查过程中发现的所有不足之处实验 室应指定专人负责采取改正措施在所有的不足之处妥善处理之后实验室认证才算完成实验 室才能允许运行。

四级生物安全水平实验室操作的复杂性超出了本手册的范围有关这方面的详细资料请与 世界卫生组织的生物安全规划1络(见附3)。

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1 WHO Biosafety programme, Department of Communicable Disease Surveillance and Response, World Health Organization, 20 Avenue Appia, 1211 Geneva 27, Switzerland (http://www.who.int/csr/).


实验室生物安全手册

5 验室生物安全水平:实验室安全检查

地点 日期

实验室管理人员

检查项目(输入检查日期)

不适用

备注

实验室

适当的警示标志:紫外线、激光、放射性物质 等………………………………………………

生物安全水平: 附上适当的生物安全检查表

供取 照执 物安 ……

实验室仪器正确标记(生物危害性、放射性、

有毒等)……………………

实验室设计

设计易于清洁……………………………………

房间的紫外灯安装互锁开关……………………

所有架子都固定…………………………………

实验台面水,能耐、碱、有溶剂和耐

热………………………………………………

提供足够的照明…………………………………

有足够的储存空间并适当使用…………………

气瓶

所有气瓶均固定…………………………………

储备气瓶均套上安全帽…………………………

窒息性气和有毒气的气瓶只于通风房

间………………………………………………

有多余气瓶或空的气瓶…………………………

化学品

易燃物品储存在易燃物品专用储存柜中………

过氧 录两 (收 开的

期)……………………………………………

化学品之间正确隔开……………………………

危害性化学品储存在目视水平线上方…………

化学品放在地板上………………………………

化学品容器敞口放置……………………………

所有溶液均正确加以标记………………………

使用水银温度计…………………………………


8 室∕动物设施认证指南

检查项目(输入检查日 不适 备注

冰箱∕冰柜∕冷库 有食物…………………………………………… 易燃物品置于防爆∕安全装备中……………… 致癌性、放射性和∕或生物危害性物质的包装

外有标签………………………………………

冷库有紧急通道…………………………………

电器 存在延长线路…………………………………… 插座接地,极性正确…………………………… 在洗涤槽旁、淋浴器下方等处接线…………… 仪器电线有磨损或损坏………………………… 超载的插座或接线板…………………………… 电源接线板架设在地板上……………………… 线路有合适的保险丝…………………………… 靠近水源的插座符合地方规定………………… 电源线有接地…………………………………… 便携式空间加热器………………………………

个体防护装备 实验室内有洗眼设施…………………………… 有安全淋浴设施………………………………… 有个 装备 、隔 护目


等)……………………………………………

操作者正确着装………………………………… 未穿实验外套、隔离衣、工作服、手套和其他

个体防护服离开实验室………………………

有低温保存的个体防护装备……………………

废弃物处理 废弃物不适当处理的证据……………………… 废弃物隔离放置在正确的容器中……………… 化学品废弃物的容器标注名称和日期并保持关

闭………………………………………………

化学品废弃物的容器适当处理并储存………… 正确使用和处理盛放锐器的容器………………地板上没有垃圾………………………………… 实验室内张贴废弃物处理程序…………………


实验室生物安全手册

检查项目(输入检查日 不适 备注

有职业保健和安全方案 危害信息的交流………………………………… 呼吸保护………………………………………… 听力保护………………………………………… 甲醛监测………………………………………… 环氧乙烷监测…………………………………… 麻醉性气体监测…………………………………

一般工程控制

实验室相于普通地、走廊及公区为负 压………………………………………………

洗涤槽或排水槽用作排风口…………………… 有洗手池………………………………………… 暴露的机器零件(滑轮、齿轮)………………

实验室工作台上的真空管路装有过滤器和防泄 阀………………………………………………

供水系统存在逆流危险………………………… 蒸馏水系统状况良好…………………………… 积极有效的虫害控制计划………………………

一般操作及

食品储存实验室外……………… 微波炉上显著标记“不得用于处理食品,仅供

实验使用 …………………………

在实验室内进食饮水吸烟和/或化妆……… 压力玻璃容器捆扎或加以防护(如使用真空气

阀)……………………………………………

禁止用嘴吸液…………………………………… 有机械吸液装置可供使用……………………… 实验室防护服与日常服装分开存放……………

普通实验室 玻璃容器存放在地板上………………………… 差错危险明显…………………………………… 工作表面有洁净吸收垫………………………… 破碎玻璃器皿用机械方法处理(扫帚和簸箕、

钳子等)………………………………………


8 室∕动物设施认证指南

检查项目(输入检查日期)

不适用

防火

喷水龙头可以移动,无阻塞……………………

墙壁天花地板等有穿透开口………………

线路或管道从门的开口穿过……………………

实验室过道至少1m…………………………

在管道系统或灯固定架上有物品存放…………

实验室中储存了过量易燃物品…………………

可加热恒温浴

装置有水位过低和过热断电保护………………

用不可燃物质制造………………………………

不适用


安全检查员签字: 完成检查日期:


实验室生物安全手册

6 验室——级生物安全水平实验室安全查。 此表与一级生物安全水平实验室安全检查表一同使用。

地点 日期

实验室管理人员

检查项目(输入检查日 不适 备注

日期:

位置:

商标:

类型:

序列号:

生物安BSC


去年认证……………… 每次操作前后均用适当的消毒剂擦拭BSC

面……………………………………

前格风过阻塞………… 安全使用明……………… 真空内置和消阀……… 房间气流安放位置对BSC有影响………… 当可能生气溶胶时使BSC…………… 实验室

只有权的可进…………

只有所有险的能进入… 在实上张的生标志……

·使、正志……………

·标,外损…………… 所有关闭……………… 清除污染

专门使用物清…………

所有染性溢出事件均向 实验室主报告………………………

在清物时使当的染剂…… 在每次操作前后每天以及发生溢出之后

清除工作面的污染…………………

污染废弃物的处理

正确使染性的容………… 容器满………………… 容器记并……………… 培养他受废弃弃前正确

清除了污……………………………

在实验室外清除污染的材料按照当地规章和 规定采用封闭耐用防漏的容器运输……


8 室∕动物设施认证指南

检查项目(输入检查日 不适 备注

混合物在和放弃物一样

处理之前进行生物净化处理……

个体防护

提醒人员理的因子进行

相应的免接种∕检………………

联系医学职业行医学评

估、监测治疗……………………

操作材料仪器套…… BSC处理感染材料时进面部保护

摘除手套之后操作感染性微生物因子之后

以及在离实验室之洗手…………

有可急救药…………

操作

在可感染胶或溅时使用

BSC……………………………………

制订生物册………… 工作读、于操程的说明

(包括安手册和操手册)并照执行

(所有工作人员每年进行一次…………

按规 ,以 成气 发生 溅……………………………………

操作微生时使锁闭注 器或一次针头注射…………………

只在BSC打开离心和转子………………

按照运输用核器将感 性标本运出BSC…………………………

设施

在靠近实验室出口处有洗手池………………

安全检查员签字: 完成检查日期:


实验室生物安全手册

7 验室——级生物安全水平:实验室安全检查。此表与一、二级生物安全水平的安全检查表一同使用。

地点 日期

实验室管理人员

检查项目(输入检查日 不适 备注

设施

实验筑物限制开…… 通过动关缓冲实验室 实验所有穿均密以封闭以

清除污染…………………………

房间通过单一途径排风并排离验区域…… 有可风系测气………

个体防护

在实穿着…………… 只在区域穿验室………

洗手动、自动………

手的保护

处理感染性材料污染的仪器以及工作表面时层手套……………………………

呼吸保护

当生物安全柜不能安全地控制气溶胶时实验 室中的所有工作人员均要佩戴呼吸保护装 置……………………………………………

操作

在生物安全柜外面进行感染性材料的工作时,

提供黏膜护………………………

将与因子特定知工作人

员…………………………………

要求工作人员阅读所有操作和规程的说(包 括安全手册或操作手册并遵照行………


工作年接程更的知识更 新∕追加训…………………………

所有弃物之前灭菌……



安全检查员签字: 完成检查日期:


第二部

实验室生物安全保



9 实验室生物安全保障的概

《实验室生物安全手册过去一直把重点放在传统的实验室生物安全指导上手册强调的是 微生物操作技术规范的应用适当的防护设备正确的实验室设计操作和维护以及如何通过行政管理来减少工作人员受伤或患病的危险在按照这些推荐意见执行时对环境以及周围较大 范围社区所造成的危险也可降到昀低目前必通过引入实验室生物安全保障措施来丰富上述实 现生物安全的传统方法。昀近全球发生的一系列事件强调有必要保护实验室以及实验内的材 以免可能因故意行为而危害人类家畜农业或环境在确定一个单位的实验室生物安全保 障的需要之前必须首先理“实验室生物安laboratory biosafety”和“实室生物安全保 障(laboratory biosecurity)”之间的差异。

“实验室生物安全一词用来描述那些用以防止发生病原体或毒素无意中暴露及意外释放的防护原则技术以及实践“实验室生物安全保障则是指单位和个人为防止病原体或毒素丢、 被窃、滥用、转移或有意释放而采取的安全措施。

有效的生物安全规范是实验室生物安全保障活动的根本通过危险度评估工(作为实验室所在机构生物安全方案中的一个组成部分来实施),可以收集关于所使用生物体的类型它们的 物理位置需要接触这些生物体的人员以及负责这些生物体人员的身份等信息这些信息可以用 于评估一个单位是否拥有这样的生物材料些生物材料对于那些企图不当使用它们的人具有诱惑力立国家标准来明确国家和各单位在防止标本原体和毒素被滥用方面应负的责

每个单位都必须根据本单位的需要实验工作的类型以及本地的情况等来制定和实施特定 的实验室生物安全保障规划因此实验室生物安全保障活动应能代表所在单位的不同需求必 要时应由科技主管研究负责人生物安全官员实验室的科研人员后勤保障人员管理人员、 信息技术人员以及执法机构和安全机构的人员来参与。

实验室生物安全保障措施应以对病原体和毒素负责任的综合方案为基础应包括对病原体和毒素的贮存位置进出人员资料使用记录设施内及设施间进行内部或外部运送的记录文件以及对材料进行任何灭活和∕或丢弃等情况的昀新调查结果同样地应制定一个单位的实验 室生物安全保障方案来鉴别报告调查并纠正实验室生物安全保障工作中的违规情况包括调 查结果中不符合规定的地方应明规定公共卫生和安全保障管理部门在发生违反安全保障事件时的介入程度、作用和责任。

与实验室生物安全培训不同所有人员都应进行实验室生物安全保障培训通过培训可以帮 助工作人员理解保护这些材料的必要性以及有关生物安全保障措施的原理培训容应包括复习有关国家标准和各单位的特殊规定在培训过程中还应说明在发生违反安全保障的事件时相关 人员具有哪些安全保障的作用和责任。

对于所有有权接触敏感材料的人员考察们在专业和道德方面是否胜任危险性病原体的工作,这也是有效的实验室生物安全保障活动的一个中心内容。

总之安全保障预防应该像无菌操作技术和其他微生物安全操作技术一样成为实验室常规 工作的一部分实验室安全保障措施不应阻碍对参比材料临床和流行病学标本以及临床或公共卫生调查中所需资料的有效共享。职能部门的安全保障管理不应过度干涉科研人员的日常活动,


实验室生物安全手册

也不应干扰其研究工作对重要的研究和临床材料的合法使用必须得到保护评估员的可靠进行专门的安全保障培训以及针对病原体制订严格的保护措施等都是促进实验室生物全保障 的有效方法所有这些努力必须通过对危险性和威胁的定期评估以及对相关措施的定期检查及 更新来加以维持检查这些措施的执行情况检查对有关规则责任和纠正措施的解释是否清楚,这些都应该是实验室生物安全保障规划以及实验室生物安全保障国家标准所必不可少的内容。


第三部

实验室设



10 生物安全

生物安全柜(Biological safety cabinetsBSCs)是为操作原代培养物、菌毒株以及诊断性标 本等具有感染性的实验材料时用来保护操作者本人实验室环境以及实验材料使其避免暴露 于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的当操液体或半流体例如摇动、 倾注搅拌或将液体滴加到固体表面上或另一种液体中时均有可能产生气溶胶在对琼脂板 划线接种吸管接种细胞培养瓶用多道加样器将感染性试剂的混悬液转移到微量培养板、 对感染性物质进行匀浆及涡旋振荡对感染性液体进行离心以及进行动物操作时这些实验室操作都可能产生感染性气溶胶。由于肉眼无法看到直径小于 5μm 的气胶以及直径为 5100μm 的微小液滴因此实验室工作人员通常意识不到有这样大小的颗粒在生成并可能吸入或交叉污 染工作台的其他材。已经表,正确使生物安全可以有效减少由于气溶胶暴露所造验室及培叉污物安时也环境。

多年以来生物安柜的基本设计已经历了多次改进要的变化是在排风系统增加了 HEPA 过滤器。对于 0.3μ m 的颗粒HEPA 器可 99.97% 更小 粒则 99.99%HEPA 滤器的这种特性使得它能够有效地截留所有已知传染因子, 并确保从全柜中排的是完全含微生物空气。生安全柜设中的第二改进是将HEPA 的空气输送到工作台面上从而保护工作台面上的物品不受污染这一特点通常被称 为实验对保护(product protection)。这些本设计上变化使得种级别的物安全柜得 到了改进,表 8 列出各种安全柜所能提供的保护。

平和垂直方向流出气流的工作柜(“超净工作台”)生物安全柜也不能应用于生物安全操作。

8 不同护类型及生物安全柜的选择

保护类型

生物安全柜的选择

个体防护,针对危险度 13 级微生物

Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级生物安全柜

个体防护针对危险度 4 级微生物手套箱型实验室

Ⅲ级生物安全柜

个体防护针对危险度 4 级微生物防护服型实验室

Ⅰ级、Ⅱ级生物安全柜

实验对象保护

Ⅱ级生物安全柜柜内气流是层流的Ⅲ级

生物安全柜

少量挥发性放射性核素∕化学品的防护

Ⅱ级 B1 物安全柜外排风式Ⅱ级 A2

型生物安全柜

挥发性放射性核素∕化学品的防护

Ⅰ级、Ⅱ级 B2 型、Ⅲ生物安全柜


实验室生物安全手册

Ⅰ级生物安全柜

6 为Ⅰ级生物安全柜的原理图房间空从前面的开口处以 0.38 m/s 的低速进入安全,空气经过工作台表面并经排风管排出安全柜定向流动的空气可以将工作台面上可能形成的气 溶胶迅速带离实验室工作人员而被送入排风管内操作者双臂可以从前面的开口伸到安全柜内的工作台面上并可以通过玻璃窗观察工作台面的情况安全柜的玻璃窗还能完全抬起来以便 清洁工作台面或进行其他处理。

安全柜内的空气可以通过 HEPA 过滤器按下列方式排出:(a)排到实验室中,然后再通过 实验室排风系统排到建筑物外面b通过建筑物的排风系统排到建筑物外面c直接排到 建筑物外面HEPA 器可以装在生物安全柜的压力排风系the exhaust plenum,也 可以装在建筑物的排风系统里有些Ⅰ级生物安全柜装有一体式排风扇而其他的则是借助建筑物排风系统的排风扇。

Ⅰ级生物安全柜是昀早得到认可的并且由于其设计简单目前仍在世界各地广泛使用Ⅰ 级生物安全柜能够为人员和环境提供保护也可用于操作放射性核素和挥发性有毒化学品但因 未灭菌的房间空气通过生物安全柜正面的开口处直接吹到工作台面上因此Ⅰ级生物安全柜对操 作对象不能提供切实可靠的保护。

6 Ⅰ级物安全柜原理图

A:前开口;B:窗口;C:排风 HEPA 过滤器;D:压力排风系统

Ⅱ级生物安全柜

胞和养物病毒其他灭菌房间过工面是 符合求的Ⅱ级全柜上不供个防护而且工作物品不空气。Ⅱ安全种不 A1 A2 B1 B2


10 安全柜

于Ⅰ安全 HEPA 菌的空气过工台面Ⅱ级物安全柜 用于 2 3 性物质使用正服的件下Ⅱ级全柜也

操作 4 性物

A1 型生物安全柜

Ⅱ级 A1 型生物安全柜如图 7 内置风机将房给空前面开口柜内入前面的进风格栅在正面开口处的空气流入速度至少应该 0.38 m/s然后供气 通过供 HEPA 过滤再向流动通过工作台面空气在向下流动到距工面大 618 cm 中的的排风格栅而另一半则通过后面的排风格栅排出有在形成胶立样向气流走,并经组排风格排出,从为实验对提供 昀好的保护气流接着通过后面的压力通风系统到达位于安全柜顶部介于供风和排风过滤器之 间的空间由于过滤器大小不同大约 70%气将经过供风 HEPA 过滤器重新返回到生物全 柜内的操作区域,而剩余的 30%经过排风过滤器进入房间内或被排到外面。

Ⅱ级 A1 型生物安全柜排出的空气可以重新排入房间里,也可以通过连接到专用通风管道上的套管或通过建筑物的排风系统排到建筑物外面。

排出加热冷却重新间内使接排外面相比 有降消耗优点有些全柜排风通风行挥发性核挥发化学作( 8)。

7 A1 物安柜原理图 A:前开口;B:窗口;C:排风 HEPA 过滤器;D:后面的压力排风系 统;E:供风 HEPA 过滤器;F:风机


实验室生物安全手册

外排风式Ⅱ A2 型以及Ⅱ级 B1 型和Ⅱ B2 型生物安全柜

外排风式 A2 以及 B1 (图 8 B2 物安全柜都是由Ⅱ级 A1 型生物安 全柜来,这些不同类型的Ⅱ级物安全柜,同Ⅰ级和Ⅲ生物安全特点见 9。生物安 全柜设计上的每一种变化可以使不同的类型适用于特定的目(参见 8)。这些生物安柜相互间 都有的差异,从前面的吸入空气度、在工面上再循气的量以安全柜中 排出的量、安的排风系是通过专排风系统通过建筑排风系统排到房间 内还是排到建筑物的外面?以及压力设(安全柜是负压状态下的生物学污染管道和压力通风系统,还是由负压管道和压力通风系统所包围的生物学污染管道和压力通风系统?)。

不同类型的 A 型和 B 型生物安全柜的详细介绍见参考文献 7 8,也可参考生产商 的说明手册。

8 B1 物安柜原理图 A:前开口;B:窗口;C:排风 HEPA 过滤器;D:供风 HEPA 过滤器; E:负压压力排风系统;F:风机;G:送风 HEPA 过滤器。安全柜需要

有与建筑物排风系统相连接的排风接口。

10 安全柜

9

Ⅰ级Ⅱ级以及Ⅲ级生物安全柜之间的差异

生物安全柜

正面气流速度

气流百%

排风系统

m/s

重新循环部分

排出部分

Ⅰ级 a

0.36

0

100

硬管

Ⅱ级 A1

0.380.51

70

30

排到房间或套管连接处

外排风式Ⅱ级 A2 a

0.51

70

30

排到房间或套管连接处

Ⅱ级 B1 a

0.51

30

70

硬管

Ⅱ级 B2 a

0.51

0

100

硬管

Ⅲ级 a

NA

0

100

硬管

NA,不适用。

a 所有生物学污染的管道均为负压状态,或由负压的管道和压力通风系统围绕。

Ⅲ级生物安全柜

Ⅲ级生物安全柜(图 9)用于操作危险度 4 级的微生物材料,可以提供昀好的个体防护。Ⅲ 级生物安全柜的所有接口都“密”,其送 HEPA 过滤排风则过两个 HEPA 过滤。 Ⅲ级生物安全柜由一个外置的专门的排风系统来控制气流使安全柜内部始终处于负压状(大 约 124.5 Pa。只有通过连接在安全柜上的结实的橡胶手套,手才能伸到工作台面。Ⅲ级生物安全柜应该配备一个可以灭菌的 HEPA 过滤排风装置的传递箱Ⅲ级生物安全柜可以与个 双开门的高压灭菌器相连接并用它来清除进出安全柜的所有物品的污染可以将几个手套箱连 在一起以增大工作面积。Ⅲ级生物安全柜适用于三级和四级生物安全水平的实验室。

生物安全柜的通风连接

A1 型和外排风式 A2 型Ⅱ级生物安全柜的设计使用“套thimble)”或“伞形canopy hood)”套管安装在安全柜的排风管上将安全柜中需要排出的空气引入建筑物的排风管 中在套管和安全柜排风管之间保留一个直径差通常为 2.5 cm 的小开口以便让房间的空气也可 以吸入到筑物的排系统中。筑物风系统的风能力必能满足房排风和安排风的要求套管必须是可拆卸的或者设计成可以对安全柜进行操作测试的类型一般来讲建筑物 气流的波动对套管连接型生物安全柜的功能不会有太大的影响。

B1 型和 B2 型生物安全柜通过硬管亦即没有任何开口地牢固地连接到建筑物的 排风系统或者昀好是连接到专门的排风系统建筑物排风系统的排风量和静压必须与生产商所 指定的要求正好一致对硬管连接的生物安全柜进行认证时要比将空气再循环送回房间或采用 套管连接的生物安全柜更费时。

生物安全柜的选择

下列护的选择实验对象保护操作危险度 14 级 微生物时的个体防护暴露于放射性核素和挥发性有毒化学品时的个体防护或上述各种防护的 不同组合。表 8 列出每一种防护类型所推荐使用的生物安全柜。

操作挥发性或有毒化学品时不应该使用将空气重新循环排入房间的生物安全柜即不与建 筑物排风系统相连接的Ⅰ级生物安全柜,或 A1 型及 A2 型生物安全柜。Ⅱ级 B1 型安全 柜可用于操作少量挥发性化学品和放射性核素。Ⅱ级 B2 安全柜也称为全排放型安全柜,在需


实验室生物安全手册

要操作大量放射性核素和挥发性化学品时,必须使用这一类型的安全柜。

9 Ⅲ级物安全柜(手套箱)示意图 A:用于连接等臂长手套的舱孔;B:窗口;C:两个排风 HEPA 过滤器;D:送风 HEPA 过滤器E双开门高压灭菌器或传递箱F化学浸泡槽安全柜需要有与

独立的建筑物排风系统相连接的排风接口。

实验室中生物安全柜的使用

空气通过前面开口进入生物安全柜的速度大约为 0.45 m/s。这样度的定向气流是极易受到 干扰的包括人员走近生物安全柜所形成的气流打开窗风系以及等都成影响理想的是生物安全柜应位于远离人员活动物品流动以及可能会扰乱气 流的地方在安全柜的后方以及每一个侧面要尽可能留有 30 cm 的空间以利于对安全柜的维。 在安全柜的上面应留有 3035 cm 空间以便准确测量空气通过排风过滤器的速度并便于排 风过滤器的更换。

操作者

生物全柜如果使用不当其防护作用就可能大大受到影响操作者在移动双臂进出安全柜 时需要小心维持前面开口处气流的完整性双臂应该垂直地缓慢进出前面的开口手和双臂伸 入到生物安全柜中等待大约一分钟,以使安全柜调整完毕并且让里面的空气“扫过”手和双臂 表面可以开对物处理开始前将需的于安柜内,


10 安全柜

尽可双臂面开数。

物品放置

Ⅱ级生物安全柜前面的进气格栅不能被纸仪器设备或其他物品阻挡放入安全柜内的物品 应采用 70%酒精来清除表面污染可以在消毒剂浸湿的毛巾上进行实验以吸收可能溅出的液所有物品应尽可能地放在工作台后部靠近工作台后缘的位置,并使其在操阻挡后部格 栅。可产生气溶胶的设备(例如混匀器、离心机等)应靠近安全柜的后部放置。像有生物害性的废弃物袋盛放废吸管的盘子以及吸滤瓶等体积较大的物品放在安全柜内的某一。在工作台面上的实验操作应该按照从清洁区到污染区的方向进行。

耐高压灭菌的生物危害性废弃物袋以及吸管盛放应放在安柜的外面否则在使这些 物品时双臂就必须频繁进出安全柜这样会干扰安全柜空气屏障的完整性从而影响对人员和物 品的防护。

操作和维护

大多数生物安全柜的设计允许整天 24 h 研究人员还发现连续工作有助于控制实验室 中灰尘和粒的水平向房间中风或通过管接口与门的排风相连接的 A1 型及 A2 型生物全柜,在不使用时是可以关闭的。其他如 B1 型和 B2 型生物安柜,通过硬管安装的就必须始终保持空气流动以维持房间空气的平衡在开始工作以前以及完成工作 以应至让安柜工 5min 的过亦即应留出将污染的空气排出安全柜 的时间。

柜的修工由有专业进行在生安全中出任何 障都告,再次使前进

紫外灯

生物全柜中不需要紫外灯如果使用紫外灯的话应该每周进行清洁以除去可能影其杀菌效果的灰尘和污垢在安全柜重新认证时要检查紫外线的强度以确保有适当的光发射量。 房间中有人时一定要关闭紫外灯,以保护眼睛和皮肤,避免因不慎暴露而造成伤害。

在生安全柜内所形成的几乎没有微生物的环境中应避免使用明火使用明火会对气流产 生影响并且在处理挥发性物品和易燃物品时也易造成危险在对接种环进行灭菌时可以使 用微型燃烧器或电炉,而不应使用明火。

实验室中要张贴如何处理溢出物的实验室操作规则一位使用实验室的成员都要阅读并理解这些规程一旦在生物安全柜中发生有生物学危害的物品溢出时应在安全柜处于工作状态下 立即进行清理要使用有效的消毒剂并在处理过程中尽可能减少气溶胶的生成所有接触溢出物品的材料都要进行消毒和/或高压灭菌。

以及定时有资的专按照的说一台安全 的运以及进行检查符合国际标准防护效估应对安完整HEPA 向下流的面气负压

换气流的式以和互进行可以行漏电


实验室生物安全手册

线强度平以性的进行试时员要门的技术设备建议质的员来试。

清洁和消毒

由于剩余的培养基可能会使微生物生长繁殖因此在实验结束时包括仪器设备在内的生物安全柜里的所有物品都应清除表面污染,并移出安全柜。

在每次使用前后,要清除生物安全柜内表面的污染。工作台面和内壁要用消毒剂进行擦拭, 所用的消毒剂要能够杀死安全柜里可能发现的任何微生物在每天实验结束时应擦拭生物安全柜的工作台面四周以及玻璃的内外侧等部位来清除表面的污染在对目标生物体有效时可以 采用漂白剂溶液或 70%酒精来消毒在使用如漂白剂等腐蚀性消毒剂后还必须用无菌水再次进 行擦拭。

推荐将安全柜一直维持运行状态。如果要关闭的话,则应在关机前运行 5min 以净化内部的 气体。

清除污染

生物全柜在移动以及更换过滤器之前必须清除污染昀常用的方法是采用甲醛蒸气熏蒸。应该由有资质的专业人员来清除生物安全柜的污染。

个体防护装备

在使用生物安全柜时应穿着个体防护服在进行一级和二级生物安全水平的操作时可穿着 普通实验服前面加固处理的反背式实验隔离衣具有更好的防在进和四全水护服室除操作使。手在隔的外面,以戴加有松紧 带的套袖来保护研究人员的手腕。有些操作可能还需要戴口罩和安全眼镜。

警报器

可以在两种警报器中选择一种来装备生物安全柜警报器只能装在带有滑动窗的安全柜上发出警报时表明操作者将滑动窗移到了不当的位置处理这种警报时只要将滑动窗移到适宜的位置就可以了气流警报器报警时表明安全柜的正常气流模式受到了干扰操作者或物品 当即处于危险状态当气流警报响起时应立刻停止工作并通知实验室主管生产商的说明手 册中将提供更详细的资料,在生物安全柜的使用培训中也应包括这一方面的内容。

补充资料

选择确类型的生物安全柜进行安装并正确使用同时每年进行认证这是一个复杂程 序。强烈经过良好训并具有富生物安操作经验监督进行作。非常熟悉参考文献部分中所出的相关献,并且过了有关柜各方面的培训。操作者应接受生物安全柜操作和使用的正规培训。

详细资料见参考文献 5 716,以及第 11 章。


11 安全设

气溶胶是一种重要的传染源应小心操作以减少气溶胶的形成和扩散范围许多实验室操作 都可能生成有害的气溶胶例如在对感染性物质进行掺和混合振摇搅拌超声处理以及离心的时候因此即使使用了安全设备可能时也昀好在经认证的生物安全柜中进行这些操作。有关生物安全柜及其使用和测试的问题在第 10 已进行了讨论。只有训练有素的操作 者在采用正确的技术时才能保证安全设备可以起到保护作用同时应该定期对安全设备进行 测试以确保其持续安全地运行。

10 出了设计用来消除或减少某些危害的安全设备的名称及其安全特征的简要说明。关

于这些设备更多更详细的资料在下面还会介绍另外在第 12 章还介绍了如何正确使用这些设

有关可能造成危害的设备与操作的资料见附录 4

10 安全设备

设备

避免的危害

安全性特征

生物安全柜

——Ⅰ级

气溶胶和喷溅

·

量减入口的气面气)。

风经

·

能保对象

——Ⅱ级

气溶胶和喷溅

·

量减窗口的气面气)。

风经

·

以保对象

——Ⅲ级

溶胶喷溅

·

高防护

·

果内流气可以作对象

负压柔性

气溶胶和喷溅

·

高水防护

膜隔离装置

喷溅罩

化学品喷溅

·

操作工作形成

移液辅助器

由于口吸生的

·

便于使用

例如病原体的食

·

制吸端的护移液助器者和

吸入用口抽吸吸

空管道

管时所生的气

·

以灭菌

从吸管中吹出或

·

制吸的泄漏

滴出液体吸管吸入

端的污染等

微型接种

移动接种时造

·

护玻陶瓷口端气体

加热器一次

的喷溅

·

次性需加热

性接种环


实验室生物安全手册

设备

避免的危害

安全性特征

设施内用

产生气溶胶溢出和

·

罩或防漏

收集并运

泄漏

·

耐用

感染性物

·

高压

进行灭菌

防漏容器

盛放锐器

意外刺伤

·

高压

一次性容器

·

固,

实验室和

微生物泄漏

·

坚固

位间运送

·

盛放的防级和

品的容器

·

于吸物的

手动或自

感染性物(以保证

·

批准设计

的高压灭

丢弃或重使用

·

效的

的安全)

螺口盖的

产生气溶胶和泄漏

·

效的

真空管道

气溶胶和出液

·

以阻胶通筒式粒大 0.45

护装置

对实验室空系

μm

的污染

·

有适剂的瓶盛皮球

可自真空

·

个系压灭菌

负压柔性薄膜隔离装置

负压柔性薄膜隔离装置是一种对生物学危害性材供昀佳防的基本防装置。该置可 以装在移动架上作空间用透明聚氯乙PVC全包裹起来悬挂在钢架结构上使离装置的内压始终维持在低于大气压力的水平。该装置入口处的空气要经一 HEPA 滤器过 而出口处的空气则要通过两个 HEPA 过滤器过滤因此不必再用管道将空气排到建筑物外面。该隔离装置可以配备培养箱、显微镜和其他实验室仪器,例如离心机、动物笼具、加热设备等。 实验物品可以通过进样和取样口运入或运出隔离装置而不影响其微生物学安全性操作时戴套 袖外加一次性手套。要安装压力计来检测隔离装置内的压力。

在常规的生物安全柜不能或不适合安装或维护的现场可以采用柔性薄膜隔离装置来进行高危险生物体(危险度 3 级或 4 的操作。

移液辅助器

在吸操作时通常必须使用移液辅助器。必须严格禁止用口吸取液体。移液辅助器的重要性无论怎么强调都不过分昀常见移液操作危害都是用口吸取液体造成

的。许多与实验室感染口吸入危的。

污染放到入端吸液将病播到太为 的是会有形成溶胶的危。在负压正压条件,棉花塞并不地过有可它被塞子塞取的能要,反而会致塞子、体被吸出采用移液助器可以作人员


11 设施

体。

当液体 吸管掉落 工作台面 ,或交替 吸或吹培 物,以及 吸管中将

操作可以 在吸可避的气胶。

选择移液辅助器时应该格外小心。移液辅助器的设计和使用不应该产生其他的感染性危害,同时还要易于灭菌和清洁。在操作微生物和细胞培养物时,应使用塞紧(防气溶胶)的吸头。

由于末 破碎或有 口的吸管 影响与移 辅助器底 的密封并 此产生危 故不 应使 的吸

匀浆器、摇床、搅拌器和超声处理器

家用(厨房用)匀浆器的密封不严并可释放气溶胶,应该使专为设计构 上可以昀大限度地减少或避免气溶胶释放的仪器设备。现在已有不同大小的消化器(stomacher) 可供使用,但也有生成气溶胶的危险性。

当用匀浆器处理危险度 3 微生物时,通常应该在生物安全柜中进行装样及重新开启。超声处理器可能释放气溶胶,应该在生物安全柜中进行操作,或者在使用期间用护罩盖住。

在使用后应该清除护罩和超声处理器的外部污染。

一次性接种环

一次性接种环的优点是无需灭菌因此可以在生物安全柜中使用否则使用本生灯和微型 加热器会扰乱气流一次性接种环使用后应置于消毒剂中并按污染性废弃物处(见第 3

微型加热器

气体和电加热的微型热器配有硼酸玻璃或陶保护罩,而减少接环灭菌时染性物质的飞溅和散布。但微型加热器会扰乱气流,因此应置于生物安全柜中靠近工作表面后缘的地方。

个体防护装备和防护服

个体防护装备和防护服是减少操作人员暴露于气溶胶喷溅物以及意外接种等危险的一个屏 障可根据所进行工作的性质来选择着装和装备在实验室中工作时必须穿着防护服在离开 实验室前,要脱下防护服并洗手。表 11 汇总在实验室中使用的一些个体防护装备及其所能提供的保护。


实验室生物安全手册

11 防护装备

装备

避免的危害

安全性特征

实验服、隔离衣、连体衣

污染衣服

·

背面开口

·

罩在日常服装外

塑料围裙

污染衣服

·

防水

鞋袜

碰撞和喷溅

·

不露脚趾

护目镜

碰撞和喷溅

·

防碰(必力校正或

外戴视力校正眼镜)

·

侧面有护罩

安全眼镜

碰撞

·

防碰撞镜片(必须有视力校正)

·

侧面有护罩

面罩

碰撞和喷溅

·

罩住整个面部

·

发生意外时易于取下

防毒面具

吸入气溶胶

·

在设括一使用的、整

个面半面净化的、

整个加罩空气净化

powered air purifyingPAPR

的以及供气的防毒面具

手套

直接接触微生物

·

得到 学认 次性

划破

胶、乙烯树脂或聚腈类材料

·

保护手

·

网孔结构

实验服、隔离衣、连体衣、围裙

好应全扣长袖开口衣、的防要比验服此更在微实验生物中的必须或培化学物学 质的溢出供进防护时,应该在实验服或隔离衣外面穿上围裙。衣物洗烫工作应在实室 机构内或就近进行。

实验服、隔离衣、连体衣或围裙不得穿离实验室区域。

护目镜、安全眼镜和面罩

根据所进行的操作来选择相应的装备,从而避免因实验物品飞溅对眼睛和面部成的危 制备屈光眼prescription glasses或平光眼镜配以专门镜框将镜片从镜框前面装上,这 种镜框用可弯曲的或侧面有护罩的防碎材料制(安全眼镜)。安全眼镜即使侧面带有护罩也不能对喷溅提供充分的保护护目镜应该戴在常规视力矫正眼镜或隐形眼(它们对生物学危害没 有保护作用的外面来对飞溅和撞击提供保护采用碎塑料制成形状与相 配,通过头带或帽子佩戴。

护目镜、安全眼镜或面罩均不得戴离实验室区域。

防毒面具

11 设施

当进行高度危险性的操理溢染性可以用防毒面具来进行防护。 根据危险类型来选择防毒面具面具中装有一种可更换的过滤器以保护佩戴者免受气、 蒸汽颗粒和微生物的影响过滤器必须与防毒面具的正确类型相配套为了达到理想的防护效 果每一个防毒面具都应与操作者的面部相适合并经过测试具有一体性供气系统的配套完整的 防毒面具可以提供彻底的保护在选择正确的防毒面具时要听从专业卫生工作者等有相应资质 人员的意见外科面罩在设计上只能保护病人而不能对工作人员提供呼吸保护有些单独使用 的一次性防毒面具(ISO 13.340.30设计用来保护工作人员避免生物因子暴露。

防毒面具不得戴离实验室区域。

当进行实验室操作时手可能被污染也容易受“锐器伤害在进行实验室一般性工作,以及在处理感染性物质血液和体液时应广泛地使用一次性乳胶乙烯树脂或聚腈类材料的手 术用手套。可重复使用的手套虽然也可以用,但必须注意一定要正确冲洗、摘除、清洁并消毒。

在操作完感染性物质结束生物安全柜中工作以及离开实验室之前均应该摘除手套并彻底 洗手。用过的一次性手套应该与实验室的感染性废弃物一起丢弃。

实验室或其他部门工作人员在戴乳胶手套尤其是那些添加了粉末的手套时曾有发生皮炎 及速发型超敏反应等变态反应的报道。应该配备替代加粉乳胶手套的品种。

在进行尸体解剖等可能接触尖锐器械的情况下应该戴不锈钢网孔手套但这样的手套只能 防止切割损伤,而不能防止针刺损伤。

手套不得戴离实验室区域。 详细资料见参考文献 1217 18


实验室生物安全手册


第四部

微生物学操作技术规



12 实验室技

室伤以及工作关的染主是由人为误﹑良实技术及仪使用当造成 。本概要绍了免或量减这类见问的技和方

实验室中标本的安全操作 实验标本的收集、运输和处理不当,会带来使相关人员感染的危险。 标本容器

标本容器可以是玻璃的但昀好使用塑料制品标本容器应当坚固正确地用盖子或塞子盖 好后应无泄漏在容器外部不能有残留物容器上应当正确地粘贴标签以便于识别标本的要求或说明书不能够卷在容器外面,而是要分开放置,昀好放置在防水的袋子里。

标本在设施内的传递

为了避免意外泄漏或溢出应当使用盒子等二级容器并将其固定在架子上使装有标本的容 器保持直立。二级容器可以是金属或塑料制品,应该可以耐高压灭菌或耐受化学消毒剂的作用。 密封口昀好有一个垫圈,要定期清除污染。

标本接收 需要接大量标本的实验室应当安排专门的房间或空间。 打开包装

防护[3] 的培训尤其是处理破碎或泄漏的容器时更应如此标本的内层容器要在生物安全柜内打开并准 备好消毒剂。

移液管和移液辅助器的使用

1、应使用移液辅助器,严禁用口吸取。

2移液管应带有棉塞以减少移液器具的污染。

3、不向含有感染性物质的溶液中吹入气体。

4、感性物质不能使用移液管反复吹吸混合。

5、不将液体从移液管内用力吹出。

6Mark-to-mark不需昀后体,好使移液

7的移该完在盛消毒碎容移液在消毒剂浸 泡适当时间后再进行处理。

8盛放弃移管的器不放在面,当放生物全柜

9有固皮下射针的注器不够用移液。

10打开口的,应使以使管的而避使皮下注射头和


实验室生物安全手册

器。

11了避免感染性物质从移液管中滴出而扩散在工作台面应当放置一块浸有消毒液的布 或吸有消毒液的纸,使用后将其按感染性废弃物处理。

避免感染性物质的扩散

1、为避免被接种物洒落,微生物接种环的直径应为 23mm 完全封闭,柄的长度应小 于 6cm 小抖动。

2使封闭电加毒接能够本生火上引起的感性 物质爆溅。昀好使用不需要再进行消毒的一次性接种环。

3、干痰液标本时要注意避免生成气溶胶。

4高压/或理的本和应当防漏内(如实室 废弃物袋)。在丢弃到废弃物盛器中以前,顶部要固定好(如采用高压灭菌胶带)。

5、在一阶段工作结束后,必须采用适当的消毒剂清除工作区的污染。详细资料见参考文献 12

生物安全柜的使用

1考国和相,对能的使都介安全使用方法和(参见第 10 )。应当发给工作人员书面的规章安全册或操作手册特别要明确的,当出现溢出﹑破损或不良操作时,安全柜就不再能保护操作者。

2、生安全柜运行正常时才能使用。

3、生安全柜在使用中不能打开玻璃观察挡板。

4、安柜内应尽量少放置器材或标本,不能影响后部压力排风系统的气流循环。

5柜内使用本否则生的干扰可能滤器。允使 用微型电加热器,但昀好使用一次性无菌接种环。

6、所工作必须在工作台面的中后部进行,并能够通过玻璃观察挡板看到。

7、尽减少操作者身后的人员活动。

8、操者不应反复移出和伸进手臂以免干扰气流。

9使实本﹑以及品阻格栅这将体流动,起 物品的潜在污染和操作者的暴露。

10作完成后以及每天下班前,应使用适当的消毒剂对生物安全柜的表面进行擦拭。

11安全柜内的工作开始前和结束后,安全柜的风机应至少运行 5min

12生物安全柜内操作时,不能进行文字工作。生物安全柜的详细介绍见第 10 章。

避免感染性物质的食入以及与皮肤和眼睛的接触

1微生物操作中释放的较大粒子和液(直径大于 5μm会迅速降到工作台面和操作者 的手上。实验室人员在操作时应戴一次性手套,并避免触摸口、眼及面部。

2、不在实验室内饮食和储存食品。

3、在验室里时,嘴里不应有东西——钢笔、铅笔、口香糖。


12 室技术

4、不在实验室化妆。

5有可潜在物质操作,操应将口和眼遮或 采取其他防护措施。

避免感染性物质的注入

1认真仔细可以损玻的刺起的染。应尽能 用塑料制品代替玻璃制品。

2损伤过皮针头德玻以及玻璃引起意外入 感染性物质。

3以下两点可以减少针刺损伤a使用注射器和针(可用一些简单的工具来打开 瓶塞使用样而射器);(b必须使射器时,采用器 安全装置。

4、不重新给用过的注射器针头戴护套。一次性物品应丢弃在防∕耐穿透的带盖容器中。

5、应用巴斯德塑料吸管代替玻璃吸管。

血清的分离

1、只经过严格培训的人员才能进行这项工作。

2、操时应戴手套以及眼睛和黏膜的保护装置。

3的实技术免或少喷溶胶。血清应当小吸 取,而不能倾倒。严禁用口吸液。

4管使完全当的中。应在中浸的时间,后 再丢弃或灭菌清洗后重复使用。

5带有血凝块等的废弃标本管在加盖后应当放在适当的防漏容器内高压灭菌和/或焚烧。

6、应有适当的消毒剂来清洗喷溅和溢出标本(见第 14 章)。

离心机的使用

1、在使用实验室离心机时,仪器良好的机械性能是保障微生物安全的前提条件。

2、应照操作手册来操作离心机。

3机放度应使个子员也到离部,放置十字和 离心桶。

4管和心标器应壁玻,或塑料并且在使前 应检查是否破损。

5、用离心的试管和标本容器应当始终牢固盖紧(昀好使用螺旋盖

6、离桶的装载、平衡、密封和打开必须在生物安全柜内进行。

7、离桶和十字轴应按重量配对,并在装载离心管后正确平衡。

8、操指南中应给出液面距离心管管口需要留出的空间大小。

9心桶蒸馏醇(70%)平衡液或盐溶液对属 具有腐蚀作用,因此不能使用。

10于危险度 3 级和 4 微生物,必须使用可封口的离心桶(安全杯


实验室生物安全手册

11使用固定角离心转子时,必须小心不能将离心管装得过满,否则会导致漏液。

12当每天检查离心机内转子部位的腔壁是否被污染或弄脏如污染明显应重新评估离 心操作规范。

13当每天检查离心转子和离心桶是否有腐蚀或细微裂痕。

14次使用后,要清除离心桶、转子和离心机腔的污染。

15使用后应当将离心桶倒置存放使平衡液流干。

16使用离心机时可能喷射出可在空气中传播的感染性颗粒如果将离心机放置在传统 的前开式的Ⅰ级或Ⅱ级生物安全柜内这些粒子由于运动过快而不能被安全柜内的气流截留而 在Ⅲ级生物安全柜内封闭离心时可以防止生成的气溶胶广泛扩散但是良好的离心操作技术 和牢固加盖的离心管可以提供足够的保护,以防止感染性气溶胶和可扩散粒子的产生。

匀浆器、摇床、搅拌器和超声处理器的使用

1室不使家用)匀因为能泄放气使用实验专 用搅拌器和消化器更为安全。

2、杯子应正常没有变形应能密,衬垫应 处于正常状态。

3使用匀摇床处理容器生压有感质的气溶就 可能从盖子和容器间隙逸出由于玻璃可能破碎而释放感染性物质并伤害操作者建议使用塑料 容器,尤其是聚四氟乙烯(polytetrafluoroethylenePTFE)容器。

4使匀浆床和理器该用实透料箱备,并在完 后消毒。可能的话,这些仪器可在生物安全柜内覆盖塑料罩进行操作。

5、操结束后,应在生物安全柜内打开容器。

6、应使用超声处理器的人员提供听力保护。

组织研磨器的使用

1拿玻璃研磨器时应戴上手套并用吸收性材料包住(聚四氟乙烯研磨器更加安全。

2、操和打开组织研磨器时应当在生物安全柜内进行。

冰箱与冰柜的维护和使用

1、低和干当定和清清理在储中破碎的瓿 和试管等物品。清理时应戴厚橡胶手套并进行面部防护,清理后要对内表面进行消毒。

2在冰所有当清明内的科、储和储存者姓 名。未标明的或废旧物品应当高压灭菌并丢弃。

3、应保存一份冻存物品的清单。

4、除有防爆措施,否则冰箱内不能放置易燃溶液。冰箱门上应注明这一点。

装有冻干感染性物质安瓿的开启

应该心打开装有冻干物的安瓿因为其内部可能处于负压突然冲入的空气可能使一些物 质扩散进入空气。安瓿应该在生物安全柜内打开,建议按下列步骤打开安瓿:


12 室技术

1、首清除安瓿外表面的污染。

2、如管内有棉花或纤维塞,可以在管上靠近棉花或纤维塞的中部锉一痕迹。

3、用团酒精浸泡的棉花将安瓿包起来以保护双手,然后手持安瓿从标记的锉痕处打开。

4、将部小心移去并按污染材料处理。

5、如塞子仍然在安瓿上,用消毒镊子除去。

6、缓向安瓿中加入液体来重悬冻干物,避免出现泡沫。

装有感染性物质安瓿的储存

装有感染性物质的安瓿不能浸入液氮中为这样会造成有裂痕或密封不严的安瓿在取出时破碎或爆炸如果需要低温保存安瓿应当储存在液氮上面的气相中此外感染性物质应储存 在低温冰箱或干冰中。当从冷藏处取出安瓿时,实验室工作人员应当进行眼睛和手的防护。

式储瓿在应对进行毒。

对血液和其他体液、组织及排泄物的标准防护方法

设计准防护方(其中包“常规预防措施[19]”)以降低从已知或未知感染源的微生物传播危[2]

标本的收集、标记和运输

1、始遵循标准防护方[2];所有操作均要戴手套。

2、应由受过培训的人员来采集病人或动物的血样。

3脉抽应当使次性真空取代针头器,因为样 可以使血液直接采集到带塞的运输管和/或培养管中。用完后自动废弃针头。

4装有标本的试管应置于适当容器中运至实验(运输要求见第 15 ),验室内部转 运也应这(见本章关“在设施内转移标本部分检验申请单应当分开放置在防水袋信 封内。

5、接人员不应打开这些袋子。 打开标本管和取样 1、应在生物安全柜内打开标本管。

2必须手套议对黏膜护(镜或面罩)。

3、在护衣外面要再穿上塑料围裙。

4、打标本管时,应用纸或纱布抓住塞子以防止喷溅。

玻璃器皿和“锐器”

1能用品代制品用实别(盐),任何破或 有裂痕的玻璃制品均应丢弃。

2、不将皮下注射针作为移液管使用(参见本章“避免感染性物质的接种”部分)。 用于显微镜观察的盖玻片和涂片 用于微镜观察的血液唾液和粪便标本在固定和染色时不必杀死涂片上的所有微生物和

病毒。应当用镊子拿取这些东西,妥善储存,并经清除污染和/或高压灭菌后再丢弃。


实验室生物安全手册

自动化仪器(超声处理器、涡旋混合器)

1、为避免液滴和气溶胶的扩散,这些仪器应采用封闭型的。

2、排物应当收集在封闭的容器内进一步高压灭菌和/或废弃。

3、在一步完成后应根据操作指南对仪器进行消毒。

1、组标本应用福尔马林固定。

2避免片。须进切片罩住,操戴安全防面 罩。清除污染时,仪器的温度要升至 20℃。

清除污染

建议使用次氯酸盐和高级别的消毒剂来清除污染一般情况可使用新鲜配制的含有效氯 1g/L 的次氯酸盐溶液处理溢出的血液时有效氯浓度应达到 5g/L戊二醛可以用于清除表面污(见 第 14

对可能含有朊蛋白物质的防护

朊蛋 prion ,也称作为“ 病毒 许多疾病 关,包括 些传染性 绵状

transmissible spongiform encephalopathiesTSEs克雅Creutzfeldt-Jakob diseaseCJD;包 括新的变异型、格--沙综合征(Gerstmann-Sträussler-Scheinker syndrome、人类致性家性失眠症和库鲁病绵羊和山羊的瘙痒病家畜的牛海绵状脑bovine spongiform encephalopathyBSE鹿糜鹿貂的传染性脑病克雅病已经传播到了人类但是没有证据证发 生过由这些病原体所引起的实验室感染不过在操作已感染或潜在感染的人或动物材料时还 是应当谨慎注意防护。

当进行与传染性海绵状脑病有关材料的工作时应根微生物因子和所研究标本的特征来选择生物安全水平并向国内权威机构咨询后进行在中枢神经系统组织中发现有昀高浓度的朊蛋 白,动物研究还表明在脾脏、胸腺、淋巴结和肺内可能也有高浓度的朊蛋白。昀近的研究表明,舌和骨骼肌组织也存在潜在朊蛋白感染的危[21-24]

由于难彻底灭活朊蛋白因此尽可能地使用一次性器具在生物安全柜的工作台面使用一 次性防护罩,这些措施都非常重要。

主要应该预防的是避免污染材料的食入或实验室人员的皮刺伤。由朊蛋白不被普 通的实验室消毒和灭菌方法所灭活,故应当遵循以下防护措施:

1、强建议使用专用仪器设备,亦即不与其他实验室共用仪器。

2穿戴防护离衣)和对病而言两层橡胶套 间戴钢丝网手套)。

3、强建议使用一次性塑料制品,它们可按干废弃物处理并丢弃。 4灭菌的问题不能使用组织处理tissue processors),应当使用广口瓶或烧(塑料

材质)替代。

5、所操作必须在生物安全柜中进行。

6、必特别小心以避免产生气溶胶、意外食入、划伤或刺伤皮肤。

7、福马林固定的组织,即使在长时间福尔马林的浸泡后,仍应视作具有感染性。


12 室技术

8、含朊蛋白的组织标本暴露于 96%甲酸 1 h 可以基失活[24, 25]

9实验台垃圾包括一次性手套隔离衣和围裙均应当采用多孔负荷蒸汽灭菌器在 134

137℃高压 18 min 个循环,或高压灭菌 3 min 六个循,然后再焚烧。

10丝网手套或 Kevlar 等非一次性用具,均必须收集起来清除污染。

11有朊蛋白的感染性废液应当用含 20g/L2%有效氯的次氯酸(终浓度处理 1 h

12甲醛熏蒸的方法不能降低朊蛋白的滴度朊蛋白对紫外线照射也具有抵抗力但是, 安全柜仍必须用标准方法来清除污染(如甲醛蒸气),以灭活可能存在的其他微生物因子。

13白污染的生物安全柜和其他表面可以采用含 20g/L2%氯的次氯酸钠处理 1 h

来清除污染。

14HEPA过滤器除后需要在至1000的温度下焚烧。在焚烧之前推荐进行下述处理: a. 在摘除用喷漆喷头给过滤器的裸露表面喷雾,

b. 在摘除程中将过滤器“装袋”,以及

c. 从工作中除HEPA过滤器,这样可以不污染难以操作的安全柜压力排风系统。

15具应当用含 20g/L2%有效氯的次氯酸钠浸泡 1 h,然后水彻底清洗再进行高压 灭菌。

16能高压灭菌的用具可以反复用含 20g/L2%效氯的次氯酸钠润湿超过 1h 来进行 清洁,并要求用水冲洗以清除残留的次氯酸钠。

微生处理资料 1226 27


13 意外事故应对方案和应急程

一个从事感染性微生物工作的实验室都应当制订针对所操作微生物和动物危害安全防 护措施。

在任何涉及处理或储存危险度 3 级和 4 生物的级生物全水护实四级全水平昀高防护实验室,都必须有一份关于处理实验室和动物设施意外事故的 书面方案。国家和/或当地的卫生部门要参与制订应急预案。

意外事故应对方案

意外故应对方案应当提供以下操作规范:

1、防自然灾害,如火灾、洪水、地震和爆炸

2、生危害的危险度评估

3、意暴露的处理和清除污染

4、人和动物从现场的紧急撤离

5、人暴露和受伤的紧急医疗处理

6、暴人员的医疗监护

7、暴人员的临床处理

8、流病学调查

9、事后的继续操作。

在制定意外事故应对方案时应考虑以下几方面问题:

1、高险度等级微生物的鉴定

2、高险区域的地点,如实验室、储藏室和动物房

3、明处于危险的个体和人群

4责任其责生物员、员、生部床医生、生 物学家、兽医学家、流行病学家以及消防和警务部门

5、列能接受暴露或感染人员进行治疗和隔离的单位

6、暴或感染人员的转移

7、列免疫血清、疫苗、药品、特殊仪器和物资的来源

8装备,如、消化学学的理盒污染的器物 品。

微生物实验室应急程序

刺伤、切割伤或擦伤

受伤人员应当脱下防护服清洗双手和受伤部位使用适当的皮肤消毒剂必要时进行医学 处理。要记录受伤原因和相关的微生物,并应保留完整适当的医疗记录。

潜在感染性物质的食入

应脱下受害人的防护服并进行医学处理要报告食入材料的鉴定和事故发生的细节并保留


完整适当的医疗记录。

潜在危害性气溶胶的释生物安全柜以外)

所有人员必须立即撤离相关区域任何暴露人员都应接受医学咨询应当立即通知实验室负 责人和生物安全官员。为了使气溶胶排出和使较大的粒子沉降,在一定时间内(例如 1 h 内)严 人员如果没有风系则应推迟进入实验室(例如 24 h

张贴“禁止进入”的标志。过了相应时间后,在生物的指导下来清除污。应 穿戴适当的防护服和呼吸保护装备。

容器破碎及感染性物质的溢出

应当立即用布或纸巾覆盖受感染性物质污染或受感染性物质溢洒的破物品。然面倒 上消并使适当然后纸巾碎物掉;片应然后用消毒剂擦拭污染区域如果用簸箕清理破碎物应当对他们进行高压灭菌或放在有效的消毒液内浸泡用于清理的布纸巾和抹布等应当放在盛放污染性废弃物的容器内在所有 这些操作过程中都应戴手套。

如果实验表格或其他打印或手写材料被污染应将这些信息复制并将原件置于盛放污染性 废弃物的容器内。

未装可封闭离心桶的离心机盛有潜在感染性物质的离心管发生破裂

如果机器正在运行时发生破裂或怀疑发生破裂应关闭机器电源让机器密(例如 30min) 使气溶胶沉积如果机器停止后发现破裂应立即将盖子盖上并密(例如 30min发生这两 种情况时都应通知生物安全官员。

随后的所有操作都应戴结实的手(如厚橡胶手套必要时可在外面戴适当的一次性手套。当清理玻璃碎片时应当使用镊子,或用镊子夹着的棉花来进行。

所有破碎的离心管玻璃碎片离心桶十字轴和转子都应放在无腐蚀性的已知对相关微 生物具有杀灭活性的消毒剂(见第 14 未破损的带盖离心管应放在另一个有消毒剂的容器 中,然后回收。

离心机内腔应用适当浓度的同种消毒剂擦拭并再次擦拭然后用水冲洗并干燥清理时所 使用的全部材料都应按感染性废弃物处理。

在可封闭的离心桶(安全杯)内离心管发生破裂

所有密封离心桶都应在生物安全柜内装卸如果怀疑在安全杯内发生破损应该松开安全杯 盖子并将离心桶高压灭菌。另一种方法是,安全杯可以采用化学消毒。

火灾和自然灾害

在制定的应急预案中应包括消防人员和其他服务人员应事先告知他们哪些房间有潜在的感 染性物质。要安排这些人员参观实验室,让他们熟悉实验室的布局和设备,这都是十分有益的。 发生然灾害时应就实验室建筑或附物的险向国家救助

人员提出警告只有在受过训练的实验室工作人员的陪同下他们才能进入这些地区感染性物 质应收集在防漏的盒子内或结实的一次性袋子中。

由生物安全人员依据当地的规定决定继续利用或是昀终丢弃。

紧急救助:联系对象

实验室生物安全手册

在设内应显著张贴以下电话号码及地址:

1和实身的(打叫的服务人员可能不知道详细地址或位置)

2、研所所长或实验室主任

3、实室主管

4、生安全官员

5、消

6、医/急救机构∕医务人员(如果可能,提供各个诊所、科室和∕或医务人员的名称)

7、警察

8、医官员

9、负的技术员

10、气和电的维修部门

急救装备

必须备以下紧急装备:

1、急箱,包括常用的和特殊的解毒剂

2、合的灭火器和灭火毯

建议配备以下设备,但可根据具体情况有所不同:

1、全防护服(连体防护服、手套和头——用于涉及危险度 3 级和 4 生物的事故) 2、带能有效防护化学物质和颗粒的滤毒罐的全面罩式防毒面具full-face respirator3、房消毒设备,如喷雾器和甲醛熏蒸器

4、担架

5、工,如锤子、斧子、扳手、螺丝刀、梯子和绳子

6、划危险区域界限的器材和警告标示。

详细资料见参考文献 12 28


14 消毒和灭

毒和灭菌基本常识于实验室物安全是要的。由严重污染物品不能迅速消毒,因解预清洁本原理也重要。关毒和灭菌下基本原用于所有已 知不同级别的微生物病原体。

清除染的殊要,要据实工作类型及所作的染性质的性来定。这 所提的一性资于建的和更专门的程处理定实室中涉及生物害。

剂的用时因具的品和生商而同。此,有消剂使的推意见必须遵 生产的说

定义

关于毒和灭菌有许多不同的术语,下面是生物安全中较常用的:

抗菌剂(antimicrobial

能够杀死微生物或抑制它们生长和繁殖的制剂。

防腐剂(antiseptic

能够抑制微生物生长和繁殖但不足将其杀灭的物质防腐剂经常

应用于体表。

生物杀灭剂(biocide

所有能够杀死生物体的制剂的统称。

化学杀菌剂(chemical

用于杀死微生物的化学品或化学混合物。

germcide

清除污染

/或生物过程也用或中

decontamination

害的和放质。

消毒剂(disinfectant

于杀物的或化但不定杀子。

毒剂非生或其面。

消毒(disinfection

死微物理手段一定孢子。

灭菌剂microbicide

够杀物的或化可以“生

杀灭剂化学”或

杀孢子剂(sporocide

于杀物和化学学混物。

灭菌(sterilization

杀死和/或去除所有微生物及其孢子的过程。

实验室材料的清洁

清洁是指去除污垢有机物和污渍清洁法包干擦浸泡肥皂水或清 洁剂的湿墩布拖擦尘土污物以及有机物是微生物的栖身之所并可能影响除污染(抗菌学杀及消)的杀菌作用。

必须通过预清洁才能实现消毒和灭菌的目的许多杀菌剂只对经过预清洁的物品才具有杀菌


实验室生物安全手册

性。时必,以露于物质。 预清洁时必须使用与以后使用的杀菌剂化学上相容的物质非常遍的是采用相同的化学杀

菌剂进行预清洁和消毒。

化学杀菌剂

多种化学品可以用作消毒剂和∕或防腐剂由于其数量与种类还在不断增加因此要根据 具体的用途认真选择。

许多化学品在较高温度时其杀菌效果更快也更好但同时较高的温度能够加速其挥发和降解因此在热带地区由于室温较高可能缩短化学杀菌剂的有效期在使用和储存这些化学品 时要特别注意。

环境有害应当按生产商的说明小心地进行选择贮存、操作使用和 废弃。为了个人的安全,建议在稀释化学杀菌剂时应戴手套、围裙和保护眼睛的器具。

化学杀菌剂一般不用于地面墙壁设备和家具的常规清洁但是在控制疾病暴发时可以使用。

正确使用化学杀菌剂可以确保实验场所的安全减少来自感染性物质的危险只要可能出 于经济原因、控制库存以及限制环境污染等的考虑,应尽可能控制所使用化学杀菌剂的量。

下面介绍一些常规使用的化学杀菌剂,并列出它们的一般用途和安全特征。除非另外标注,杀菌剂的浓度用重量/体积(w/v来表示。表 12 汇总了含消毒剂的推荐使用浓度。

12 消毒剂的推荐使用浓度

况下 a

况下 b

所需的有效氯浓度

0.1%1 g/L

0.5%5 g/L

氯酸 (含 5 的有

20 mL/L

100 mL/L

次氯酸钙(含有 70有效氯)

1.4 g/L

7.0 g/L

二氯异氰尿酸钠粉剂(含 60%的效氯)

1.7 g/L

8.5 g/L

二氯异氰尿酸钠片剂(每片含 1.5 g 有效氯)

每升 1

每升 4

氯胺(含有 25%的有效c

20 g/L

20 g/L

a 去除大部分污染材料后

b 溢流情况(如血液)或大量污染材料没有除去时

c 参见正文

氯(次氯酸钠)

氯属于快速作用的氧化剂是一种可广泛应用的广谱化学杀菌剂它一般以次氯酸NaOCl) 溶液来作为漂白剂销售,使用时可以用水稀释成各种不同的有效氯浓度。

用作性的金属有机白质著减弱其口容器储藏高浓度的或使用浓度的漂白剂尤其在高温条件下会释放氯气而减 弱其杀菌能力。要根据剂工作液的初始浓度、容器的类型(如有无盖子)和、使用的


14 和灭菌

频率和特性以及室内条件来确定它们的更换频率一般而言对于那些需要一天多次浸泡处理 含有高浓度有机物的材料的漂白剂溶液应当至少每天更换一次而那些使用频率较低的漂白剂 溶液,则可以维持一周时间。

常规实验室消毒剂的有效氯浓度应为 1 g/L。推荐使用含 5 g/L 效氯作用溶液 处理危害性物的溢出以及含有大量有机物的情况作为家用漂白剂的次氯酸钠溶液含有 50 g/L 效氯因此分别需要进行 150 110 的稀来达到终浓度 1 g/L 5 g/L工业用 漂白剂的次氯酸钠溶液含有近 120 g/L 的有效氯,必须进行相应的稀释来达到上述浓度。

次氯CaClO2]的粒或片剂般含 70%的有效氯用颗粒或剂配制浓度 1.4 g/L 7.0 g/L 的溶液,其有效氯浓度分别为 1.0 g/L 5 g/L

不建议将漂白剂当作防腐剂使用但可以作普通目的的消毒剂以及用于浸泡非金属类的污染材料。在紧急情况下也可以用终浓度含 12 mg/L 有效氯的漂白剂来消毒饮用水。

氯气具有强毒性因此漂白剂只能在通风良好的地方储存和使用另外漂白剂也不能与酸混合以避免氯气快速释放。氯的许多副产物可能对人体及环境有害,应该避免滥用含氯消毒剂, 特别是漂白剂。

二氯异氰尿酸钠

尿酸NaDCC的粉 60%有效氯 NaDCC 配制浓度 1.7 g/L 8.5 g/L 液将别含 1 g/L 5 g/L 的有NaDCC 片剂每片含有 1.5g 的有效氯, 将 1 片或 4 片溶于 1 水将分别获得浓度约为 1 g/L 5 g/L 的溶液粉剂或片剂的 NaDCC 储存 既方便又安全血液或其他生物危害性液体溢出时可以使用固体 NaDCC并使其作用至少 10min 后再除去,然后对污染区进行进一步的清理。

氯胺

含有大 25%的效氯氯胺释速度比次氯此如获得次氯 相同就需要较高的初始浓度另一方面有机物对氯胺的影次氯么大清洁“污染”况下都推荐使用 20 g/L 的浓度。

氯胺溶液实际上无臭味但是浸泡在氯胺中的物品必须要彻底清洗以除去加入到氯-T

(甲苯磺酰氯醛甲酰胺钠)粉剂中的填充剂的残留物。

二氧化氯

二氧化氯是一种高效的快速杀菌剂防腐剂和氧化剂经常有报道认为其在浓度低于漂白粉的含氯浓度时即具活性。二氧化氯作为气体是不稳定的,将分解为氯气(Cl2和氧气O2, 并放热然而二氧化氯溶于水并在水溶液中稳定有两种方法可获得二氧化氯1

HCl)和亚氯酸钠(NaClO2)两种单独成分混合时即可生成2)订购其稳定态,然后在需要 时随时活化生成。

就氧化杀菌剂而言二氧化氯是高选择性的氧化剂和氯比二氧化氯有更高的反应活, 能氧化大多数的有机物然而二氧化氯仅同还原性硫化物仲胺叔胺以及其他强还原性和反应活性的有机物作用因此与使用氯和臭氧相比二氧化氯在含量低得多的情况下能得到更 稳定的反应产物在有机物较多的情况下由于其选择性使用适量的二氧化氯比臭氧和氯更有 效。

甲醛

20℃时,甲HCHO)是一能够杀有微生物其孢子的体。但


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对朊蛋白没有杀灭

相对需要相湿度 70%左场上出售的产品为多聚甲——一 种固体多聚体,呈薄片状或小块状,或为福尔马林——一种浓度约为 370 g/L37%)的气体水 溶液其中含甲100 mL/L作为稳定剂两种形式加热都可以产生气体用于封闭空(如 生物安全柜和房间的清除污染和消(见本“清除局部环境污染部分5尔马 水溶以作消毒

怀疑是癌剂有刺体能够刺激眼睛和黏膜,因此必在 通风橱或通风良好的地方储存和使用。必须遵守国家化学品安全规定。

戊二醛

象甲醛一样戊二OHCCH23CHO也对繁殖的细菌孢子真菌和含脂或不含脂的 病毒具有活性。它不具有腐蚀性,比甲醛作用迅速,但也需要几个小时才能杀死细菌孢子。

通常所供应的戊二醛是浓度约 20 g/L2)的溶液,绝大部分产品使用前需要加入与提供的碳氢盐混合进行“活(变成。活的溶液根据其配方设计、应用类型 和使用频率等情况可以重复使用 14 周。与有些产品一同提供的指示计(dipstick仅用于粗略 指示溶液中的活性水平戊二变混应当

戊二醛有毒对皮膜具激性避免与其接触。必须在通风橱或通风 良好的地方使用不建议采用其喷雾剂或溶液来清除环境表面的污染必须遵守化学品安全的国 家规定。

酚类化合物

酚类化合物是一大类昀早使用的杀菌剂但是昀近出于安全考虑而限制了它的使用它们 对繁含脂病具有活性,适当配制后,对分枝杆菌也有活性对孢子没,而对于非含脂病毒的活性则不确定许多酚类产品可用于清除环境表面的污染(如三氯二是昀常的抗菌剂。

三氯生常作为洗手用品。它主要对繁殖的细菌有活并且和黏全的验研发现对低度三氯生具有耐受性的细菌对某些抗生素也有耐受性该领域中这一发现 的意义还不清楚。

有些酚类化合物对水的硬度敏感并可能导致失活因此必须使用蒸馏水或去离子水来进行稀释。

不建议在食物接触的表面和幼儿活动场所使用酚类化合物它们可能被橡胶吸收也可能渗 透皮肤。必须遵守国家化学品安全规定。

季铵盐类化合物

季铵盐类化合物大多混合使用也经常与醇类等其他杀菌剂联合使用季铵盐类化合物对繁 殖的细菌和含类病毒有良。某(如铵)作防腐剂。

有些铵盐类化合物的杀菌作用会受有机质水的硬度以及阴离子去污剂的显著影响因此当使铵盐化合物行消毒时要认真选预清洁所的品种。些具危害的细菌能够在季铵盐化合物溶液中生长由于其生物降解能力较低这些化物也可能在环境中蓄

乙醇

乙醇(C2H5OH)和异丙醇CH32CHOH]具有相似的灭菌特性。它们对于繁殖的细菌、


14 和灭菌

真菌和含脂病毒具有活性但不能灭活孢子而对非含脂病毒的作用则不确定其水溶液昀有效 的使用浓约为 70%(v/v);更高或更低的度均不适杀菌。醇溶液的主优点是后 物品不会留下任何残留物。

将乙醇与其他试剂混合使用比单独使用更有效 70v/v醇和 100 g/L 的甲醛混合使 用,以及使用含有 2 g/L 有效氯的乙醇。70%v/v)乙醇溶可以用于消毒皮肤、实验台和生物 安全柜的工作台面以及浸泡小的外科手术器械由于乙醇可以使皮肤干燥所以经常与润滑剂混合使用在不便于或不可能进行彻底洗手的情况下推荐使用含乙醇的擦手液对轻度污染的手 进行消毒。但是必须记住,乙醇对孢子无效,而且不能杀死所有类型的非含脂类病毒。

乙醇是挥发不能明火使作液应储存在适当的容器内以避免醇 类挥发乙醇可以硬化橡胶并溶解某些胶质为了避免乙醇用于其他非灭菌目的在实验室里对乙醇进行专门的清点和储存是非常重要的乙醇溶液的瓶子必须清楚标记以避免被意外高压 灭菌。

碘和碘伏

这类消毒剂的作用与氯类似只是有机质对它们的抑制作用略弱碘可以使纤维和环境表面 着色,一般不适合作为消毒剂。但是,碘伏和碘酊是很好的抗菌剂。多聚碘(polyvidone iodine) 是一种安全可靠的外科手术擦手剂和手术前皮肤抗菌剂类抗菌剂一般不适于医疗/牙医器械 的消毒。碘不能在铝或铜上使用。

碘有毒性含有有机碘的产品必须于 410储存以避免有潜在危害性的细菌在里面生长。

过氧化氢和过氧乙酸

像氯一样过氧化H2O2和过氧乙CH3COOOH是强氧化剂是一种广谱杀菌剂。 对人和环境它们较氯更为安全。

通常供应的过氧化氢是可以立即使用的 3%的溶液,或是用无菌水稀释 510 倍体积后使用 的 30但是种单独 36氧化溶液杀菌用缓慢而有限现有产 品中含有其他成分来稳定过氧化氢,加速其杀菌作用并降低其腐蚀性。

氧化氢能用于清除验台和生安全柜工的污染,高浓度的液适于清除对热 敏感的医疗∕牙医器械的污染过氧化氢或过氧乙酸熏蒸来消毒对热敏感的医疗/牙医器械时,需要特殊的设备。

过氧氢和过氧乙酸能腐蚀铝黄铜锌等金属也能使纤维头发及黏膜褪。经它们处理的物品必须经过彻底的漂洗后才能接触眼睛和黏膜它们当储存在避热和避光的地 方。

清除局部环境的污染

需要联合应用液体和气体消毒剂来清除实验室空间用具和设备的污染清除表面污染时可 以使用次氯酸钠(NaOCl)溶液;含有 1%有氯的溶液适于普通的环境卫生设备,但是当理 高危环境时建议使用高浓5 g/L溶液于清除环境污染时含有 3%过氧氢的溶液也 可以作为漂白剂的代用品。

以通过加多聚甲醛煮沸福尔林所产生蒸气熏蒸清除房间仪器的污染。这 是一项需要由专门培训的专业人员来进行的非常危险的操作产生甲醛蒸气间的所(如)都封带物加以封。熏蒸应当在室温不低于 21相对湿度 70% 条件(见清除全柜染”


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清除污染时气体需要与物体表面至少接触 8h。熏蒸,该区域必须彻底通风后才能允许人员进入在通风之前需要进入房间时必须戴适当的防毒面具可以采用气态的碳酸氢铵来中和 甲醛。

采用过氧化氢溶液对小空间进行气雾熏蒸同样有效,但需要专门的蒸气发生设备。

清除生物安全柜的污染

清除Ⅰ级和Ⅱ级生物安全柜的污染时,要使用能让甲醛气体独立发生、循环和中和的设备。 应当将适量的多聚甲(空气中的终浓度达到 0.8%放在电热板上面的长柄平锅(在生物全柜外进行控制。然后将含有比多聚甲醛多 10%的碳酸氢铵置于另一个长柄平锅中(在生物柜外将该置到加热在安将电上插头通, 以便在柜开关头控的操如果相对湿 70,在使用带[道胶带duct tape]密前部封闭板前,还要在安全柜内部放置一个开口的盛有热水的容器如果前部没有封闭板则可以用大块塑料布粘贴覆盖在前部开口和排气口以保证气体 不会泄漏进入房间。同时供电线穿过前封闭板的穿透孔须用管道胶带密封。

将放多聚甲醛平锅的加热板插上插头接通电源。在多聚甲醛完全蒸发时拔掉插头以断电。 使生物安全柜静置至少 6 h。然后放有第二个平锅的加热板插上插头通电,使碳酸氢铵蒸发。

然后拔掉电插头接通生物安全柜电源两次每次启动约 2 秒钟来让酸氢铵气体循环在移去前封闭板(或塑料布)和排气口罩单前,应使生物安全柜静置 30min。使用前应擦掉生物安全柜 表面上的残渣。

洗手/清除手部污染

处理生物危害性材料时只要可能均必须戴合适的手套但是这并不能代替实验室人员需要 经常地、彻底地洗手。处理完生物危害性材料和动物后以及离开实验室前均必须洗手。

大多数情况下用普通的肥皂和水彻底冲洗对于清除手部污染就足够了但在高度危险的情 况下建议使用杀菌肥皂手要完全抹上肥皂搓洗至少 10 秒钟水冲用干的纸 或毛(如件,可使用暖风干手器

推荐使用脚控或肘控的水龙头如果没有安装应使用纸巾或毛巾来关上水龙头以防止再 度污染洗净的手。

如上所述,如果没有条件彻底洗手或洗手不方便,应该用酒精擦手来清除双手的轻度污染。

热力消毒和灭菌

常用病原的物手段没有腐蚀性可用来处理实验器材中许多可耐受 160高温 24 h 物品或焚下)也一种干热方式。高压灭菌的湿热法则昀为有效。

煮沸并不一定能杀死所有的微生物或病原体但如果其他方学杀菌除污染菌)或没有件时,也可以作为一种昀起码的消毒措施。

灭菌后的物品必须小心操作并保存,以保证在使用之前不再被污染。

高压灭菌

蒸汽灭菌实验料进菌的昀有效和昀可靠的方法对于大 多数目的,下列组合可以确保正确装载的高压灭菌器的灭菌效果:


14 和灭菌

1134℃、3min

2126℃、10min

3121℃、15min

4115℃、25min

下面是不同高压灭菌器的例子。

重力置换式“下气式)高灭菌器 10 是重力换高压灭菌器的整体构造。蒸汽在 压力作用下进入灭菌器由上而下置换较重气并菌器(装 HEPA 滤器)

真空式高灭菌 样的灭菌可以在蒸前使空气灭菌器排。气体是通过一 个装有 HEPA 过滤器的排气阀排出。在灭菌结束时,蒸汽自动排出。这种高压灭菌可以在 134℃ 下进行因此灭菌周期可以缩短至 3min预真空高压灭菌器对于多孔性物品的灭菌很理想但 由于要抽真空而不能用于液体的高压灭菌。

料加热压锅式高压 在没有重式高压灭器的情况才使用这一种灭 菌器从其顶部装载物品通过燃气电力或其他燃料来加热通过加热容器底部的水来产生蒸 汽,上置排气孔排出。当所有的空气排出后,关闭排气孔的阀门,缓慢热使压力和温度上升到安全阀预置的水平此时记为灭菌开始时间灭菌结束后停止加热让温度 下降到 80以下再打开盖子。

10 置换高压灭

高压灭菌器的装载

为了利于蒸汽的渗透和空气排出高压灭菌物品应松散包装放置在灭菌器内要使蒸汽能够


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作用到其内容物。

高压灭菌器使用注意事项 下列规定能够减小操作压力容器时会发生的危害: 1、应受过良好培训的人员负责高压灭菌器的操作和日常维护。

2性的序应由有员定灭菌、门性以及所的 仪表和控制器。

3使用饱,并不含抑制他化这些能污染正灭 菌的物品。

4要高的物放在够排有良透性中;灭菌柜 腔装载要松散,以便蒸汽可以均匀作用于装载物。

5菌器内部加压时互锁安全装置可以防止门被打开而没有互锁装置的高压灭菌器, 应当关闭主蒸汽阀并待温度下降到 80℃以下时打开门。

6、当压灭菌液体时,由于取出液体时可能因过热而沸腾,故应采用慢排式设置。

7、即使温度下降到 80℃以下,作者打开门时也应当戴适当的手套和面罩来进行防护。

8行高效果监测物指热电置于压灭菌物的 中心。昀好在“昀大”装载时用热偶计和记录仪进行定时监测,以确定灭菌程序是否恰当。

9、灭器的排水过滤器(如果有)应当每天拆下清洗。

10当注意保证高压灭菌器的安全阀没有被高压灭菌物品中的纸等堵塞。

焚烧

在处理那些经过或事先未经清除污染的动物尸体以及解剖组织或其他实验室废弃物时烧是一种有效的方法(见第 3 有在实验室可以控制焚烧炉的条件下,才能用焚烧代替高压灭菌来处理感染性物质。

需要有效控制温度并配备二级焚烧室时才能实现彻底焚烧许多焚烧炉尤其是那些只有 单个焚烧室的不能满足处理感染性物质动物尸体和塑料制品的要求这些材料可能不能完全销毁微生物有毒化学品和烟尘还可能通过烟囱排放而污染大气但也有许多结构令人满意的焚烧室。理想的是一级焚烧室的温度至少应达到 800℃,级焚烧室的温度至少应达到 1000℃。

焚烧的材料(即使事先已清除污染)应当用袋子运送焚烧室,昀好使用塑料。负 责焚烧的工作人员应当接受关于如何装载和控制温度等的正确指导还需要注明的是焚烧炉的操作是否有效主要取决于对需要处理的废弃物中物品的正确混合。

人们已经关注到现有的或计划制造中的焚烧炉可能对环境造成的负面影响并正力使焚烧炉 对环境的影响更小,也更节约能源。

废弃物处理

实验室和医学废弃物的处理要遵守各个地区国家和国际的规定在设计和执行关于生物危害性废弃物处理运输和废弃的规划之前必须参考昀新版的相关文件一般情况下焚烧炉内 的灰烬可以作为普通家庭废弃物处理并由地方有关部门运走高压灭过的废弃物可以在其他地方焚烧后处理,或在指定垃圾场掩埋处理(见第 3

详细资料见参考文献 13 2939


15 感染性物质的运

感染性及潜在感染性物质的运输要严格遵守国家和国际规定规定描述了如何正确使用 包装材料,以及其他的运输要求。

实验室人员必须按照可适用的运输规定来运送感染性物质。按照规定执行可以实现:

1、减包装受损和泄漏的可能性,因此

2、减可能造成传染的暴露;

3、提运输效率。

国际运输规定

感染性物质运输规(按各种运输方式以联合“危险性货物运输的规章范本[40]基础。 联合国的些推荐意是由危险货物运输联合国专委员会(United Nations Committee ofExports on the Transport of Dangerous GoodsUNCETDG制定要成为法律上的规章合法的一部分必须由有资格的权威机构将联合国规章范本应用到国家规定和国际规章范本[例如国际 民用航空组International Civil Aviation OrganizationICAO针对危险性货物运输制订《危 险性货物安全空运的技术说明 Technical Instructions for the Safe Transport of Dangerous Goodsby Air[41]《国际危险性货物陆运欧洲协议the European Agreement concerning the International Carriage of Dangerous Goods by RoadADR[42]]。

国际空运协会(International Air Transport AssociationIATA)每年发布《感染性物质运输指 南Infectious Substances Shipping Guidelines)”[43]IATA南必须以遵守ICAO术说明作 为昀低标准,但可以增加其他要求。如果IATA成员运输上述物品,则必须遵守IATA指南。

由于联合国关于危险性货物运输的规章范本每二年修订一次应参照国家和国际规章范 本的昀新版本。

界卫生组织UNCETDG咨询。联合国关于感染性物质运输规章范13版(2003

[40]采纳了输规定中的主要变化。可以WHO[44]得到关修正案采纳的背景的有关说明。

国际规章范本并非要取代各地方或国家要求但在有些还没有国家要求的情况下就应遵守 国际规章范本。

注意以下这一点非常重要:感染性物质的国际运输还必须依据并遵守国家进∕出口的规定。

基本的三层包装系统

在感染性及潜在感染性物质运输中选择使用的三层包装系统其示意图见图11这一包装系 统由三层组成:内层容器,第二层包装以及外层包装。

装载标本的内层容器必须防水防漏并贴上指示内容物的适当标签内层容器外面要包裹足 量的吸收性材料,以便内层容器打破或泄漏时,能吸收溢出的所有液体。

防水防漏的第二层包装用来包裹并保护内层容器有些包装好的内层容器可以放在独立的 第二层包装中。有些规定中包括了感染性物质包装的体积及重量限度。


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A类感染性物质的包装与标签

B类感染性物质的包装与标签

11 包装系统实(图片IATA, Montreal, Canada供)


15 性物质运输介绍

第三层包装用于保护第二层包装在运输过程中免受物理性损坏按照昀新规定的要求还应 提供能够识别或描述标本的特性以及能够识别发货人和收货人的标本资料单信件和其他各种 资料,以及其他任何所需要的文件。

联合国规章范本规定使用两种不同的三层包装系统本的三层包装系统用于运输多数感染性物质但那些高危险度的生物体则必须按更严格的要求进行运输关于如何根据运输材料来选 用不同包装的详细资料,建议读者参考国家和∕或国际的规章范本。

溢出清除程序

当发生感染性或潜在感染性物质溢出时,应采用下列溢出清除规程:

1、戴套,穿防护服,必要时需进行脸和眼睛防护。

2、用或纸巾覆盖并吸收溢出物。

3、向纸巾上倾倒适当的消毒剂,并立即覆盖周围区域(通常可以使用5%剂溶液;在 飞机上发生溢出时,则应该使用季铵类消毒剂)。

4、使消毒剂时,从溢出区域的外围开始,朝向中心进行处理。

5作用适当时间(例如30 min),将所处物质清理掉如果含碎玻璃或其他锐器则要使用簸箕或硬的厚纸板来收集处理过的物品,并将它们置于可防刺透的容器中以待处理。

6、对出区域再次清洁并消毒(如有必要,重复25步)。

7、将染材料置于防漏、防穿透的废弃物处理容器中。

8、在功消毒后,通知主管部门目前溢出区域的清除污染工作已经完成。


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第五部

生物技术介



16 生物安全和重 DNA

重组DNA技术涉合不同来的遗传信,从而创自然界以可能从未在过遗传 饰生genetically modified organismsGMOs昀初子生中有这些生物 可能可预良性从实出将物学种担心在1975年美利福尼亚阿西洛马召开会议[45]为焦那次讨论DNA题并提出第一个重DNA南。接下25年多的究经验证,在进行适当估并适当措施可以进行程工

重组DNA技术或遗传工程昀初是用来将DNA片段克隆到微生物宿主中以过表达特定的基因 产物用于进一步研究。重组DNA子也已经用于获得遗传修饰生物体,如转基因和“基因敲除” 动物以及转基因植物。

重组DNA技术已物学和医产生巨大响,并且于整个人基因组的酸序已经 了解能会大的成千未知基因重组DNA术来行研因治成为病的法,传工将可出许基因移载样地重组DNA术获基因可能农业日益角色。

构建使用GMOs实验应首生物估。物体病原和所有潜在危害可能都是新型的没有确定的供体生物的特性将要转移的DNA列的性质受体 生物的特性以及环境特性等都需要进行评估些因素将有助于决定安全操作目标遗传修饰生物体所要求的生物安全水平,并确定应使用的生物学和物理防护系统。

生物表达系统的生物安全考虑

物表达系统由载体和宿主细胞组成。必须满足许多标准使其能有效、安全地使。质粒 pUC18样一种生物表达系统的实例pUC18经常与肠杆K12细胞一起使为克测序已经完成。所有需要在其他细菌表达的基因已经从它的前体质粒pBR322中删大肠K12是一病性它不康人的消持久如果入的外源DNA表达产物不要求更高级别的生物安全水平那么肠杆K12/pUC18可以在一生物 全水常规的工程进行

表达载体的生物安全考虑

下列情况需要较高的生物安全水平:

1、来于病原生物体DNA列的表达可能增加GMO的毒性

2、插DNA性质不确定,例如在制备病原微生物基因组DNA库的过程中

3、基产物具有潜在的药理学活性

4、毒的基因产物编码。

用于基因转移的病毒载体

病毒载(腺病毒载体可以用于将基因有效地转移到其他细胞这样的载体缺少病毒复制 的某些基因,可以在能够补充这些缺陷的细胞株内繁殖。


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这类病毒载体的贮存液中可能污染了可复制病毒是由繁殖细胞株中极少发生的自发性 重组产生的。这些载体操作时应采用与用于获得这些载体的母体腺病毒相同的生物安全水平。

转基因动物和“基因敲除”动物

携带外源性遗传信息的动(转基因动物应当在合外性基特性水平操作定基因被有目的地删除的动物因敲除”动物)一般不表现特殊的生物危害。

括那些表病毒受体转基因动一般不会种系病毒如果这种物从实验室逃离 并将转移基因传给野生动物群体,那么理论上可以产生储存这些病毒的动物宿主。

目前已经就脊髓灰质炎病毒特别是与根除脊髓灰质炎相关的问题讨论了上述可能性室获达人质炎受体转基因小,它们对同接种途的脊髓灰炎病 毒的感染都很敏感所产生的疾病在临床和组织病理学上也与人脊髓灰质炎相类似但小鼠模型与人不同的是在口腔接种脊髓灰质炎病毒后肠道内的病毒复制不充分或没有发生因此如 果这种转基因小鼠逃到野外几乎不可能产生脊髓灰质炎病毒新的宿主动物但是这个例子表明对于每一种新的转基因动物应当通过详细研究来确定动物的感染途径感染所需的病毒接 种量以及感染动物传播病毒的范围此外应当采取一切措施以确保对受体转基因小鼠的严密防 护。

转基因植物

些表达了够耐受除剂或抵抗虫能力等转基因植,目前在界许多地区都引 起相当的争议。这些争议的焦点是这类植物作为食物的安全性,以及种植后的长期生态后果。

或人因的植物发医和营危险评估确定 这些转基植物产品所需的生物安全水平。

遗传修饰生物体的危险度评估

传修体(GMOs有关进行评估考虑受体宿生 物体的特性。

所需考虑的特性包括以下几方面:

插入基因(供体生物)所直接引起的危害

当已经知道插入基因产物具有可能造成危害的生物学或药理学活性时则必进行危险度评 估,例如:

1、毒素

2、细因子

3、激素

4、基表达调节剂

5、毒因子或增强子

6、致基因序列

7、抗素耐药性

8、变反应原。

在考虑上述因素时,应包括达到生物学或药理学活性所需的表达水平的评估。

与受体∕宿主有关的危害

16 安全和重组 DNA 技术

1、宿的易感性

2、宿菌株的致病性,包括毒力、感染性和毒素产物

3、宿范围的变化

4、接免疫状况

5、暴后果。

现有病原体性状改变引起的危害

许多遗传修饰并不涉及那些产物本身有害的基因于现有非致病性或致病性特征发生了变化导致可能出现不利的反应正常的基因修饰可能改变生物体的致病性为了识别这些潜在 的危害,应考虑下列几点(但不限于以下几点):

1、感性或致病性是否增高?

2、受的任何失能性突变是否可以因插入外源基因而克服?

3、外基因是否可以编码其他生物体的致病决定簇?

4如果外源DNA实含有致病决定簇那么是否可以预知该基因能否造成GMO的致病性?

5、是可以得到治疗?

6GMO对于抗生素或其他治疗形式的敏感性是否会受遗传修饰结果的影响?

7、是可以完全清GMO

进一步的考虑

采用动物或植物整体进行实验研究时也需要小心考虑研究工作要遵守所在国家及单位从 事GMOs工作的有关规定、限制和要求。

家都的专们制从事GMOs作的指南助科他们作按 适当的生安全水平行分类。有情况下,不国家之间的类可能不同或者当知些载

/宿主系统的新信息时,会将相关工作归入更高或更低的生物安全水平。

危险度评估是一种动态发展的工作它必须考虑到科学的昀新进展进行适当的危险度评估 可以确保人类在未来继续得益于重组体DNA术。

详细资料见参考文献174648


实验室生物安全手册


第六部

化学品、火和电的安



17 危害性化学

在微生物学实验室中的工作人员不仅会接物,也会化学因此让他充分 了解这些化学品的毒性作用暴露途径以及可能与操作和储存这些化学品有关的危(见附录 5) 是至关重要的可以从化学品生产商和∕或供应商那里得到有关的物质安全资料material safety data sheetsMSDS他有关化学危害的资料。在使用这些化学品的实验室中,应可方便查阅上述资料,例如可以将其作为册或作手册的一部

暴露途径

人们能通过下列方式暴露于危险性化学品:

1、吸入

2、接触

3、食入

4、针刺

5、通破损皮肤。

化学品的储存

实验室应该只保存满足日常使用量的化学品大量的学品应储存在专门指定的房间或建筑 物内。

化学品不应按字母顺序存放。

关于不相容化学品的一般原则

为了避免发生火灾和∕或爆炸 13 中左一栏的物质在贮存和操作中应避免接触表 13 中 相应的右边一栏里的物质。

13 不相容化学品的一般原则

化学物质类别

不相容化学品

碱金属,如钠、钾、铯以及锂

二氧化碳、氯代烃、水

卤素

氨、乙炔、烃

醋酸、硫化氢、苯胺、烃、硫酸

氧化剂,如铬酸、硝酸、过氧化物、高锰酸盐

化学品的毒性作用

在操作某些化学品或吸入它们的蒸气时会对人体健康产生不良影响除了众周知的毒性物 质以外已知许多化学品都有不同的毒性作用可能对呼吸系统血液肾脏和


实验室生物安全手册

道系统以及其他器官和组织造成不良影响或严重损害,而有些化学品具有致癌性或致畸性。 有些可溶性蒸气在吸入后是有毒性作用的除了上面所提到的许多严重影响外发生暴露时

还可能导致一些不能被立即识别的对人体健康的损伤其中可能包括协调性差嗜睡及类似的症

状,并使出现事故的可能性增大。 长期反复接触许多液态有机溶剂可能造成皮肤损害这可能是由于有机溶剂的去脂效果

外还可能出现过敏和腐蚀症状。

关于化学品毒性作用的详细情况见附录 5

爆炸性化学品

通常液中碰撞造成铜的因此物不铜或污水管道接触。

乙醚老化和干燥形成结晶后极不稳定,可能会爆炸。 高氯酸如果在木制品、砌砖或纤维性物质上干燥时,一旦碰撞会发生爆炸并引起火灾。 苦味在加热和击时会发生爆炸。

化学品溢出

室化学品大多数生商都会发描述化学溢出理的示意,溢出处的示意图工具 盒都能买到。应该将适当的示意图张贴在实验室中显著的位置,并应配备下列物品:

1、化品溢出处理工具盒

2、防服,例如耐用橡胶手套、套鞋或橡胶靴、防毒面具

3、铲和簸箕

4、用夹取碎玻璃的镊子

5、拖、擦拭用的布和纸

6、桶

7、用中和酸及腐蚀性化学品的苏打(碳酸钠Na2CO3)或碳酸氢钠(NaHCO3

8、沙(用于覆盖碱性溢出物)

9、不燃的清洁剂。

当发生大量化学品溢出时,应该采取下列措施:

1、通有关的安全官员

2、疏现场的闲杂人员

3、密关注可能受到污染的人员

4溢出燃性应熄明火该房及相的煤气,开 窗户(可能时),并关闭那些可能产生电火花的电器

5、避吸入溢出物品所产生的蒸气

6、如安全允许,启动排风设备

7、提清理溢出物的必要物品(参见上面)。

压缩气体和液化气

关于压缩气体和液化气的情况见表 14


17 性化学品

14 气体和液化气的贮存


容器 压缩气体钢瓶和液化气容器 a, b

小型单次使用的气体钢瓶 a, b


贮存要求

· 应该安全地固定(例如用铁链锁住)在墙上或坚固的验台 上,以确保钢瓶不会因为自然灾害而移动。

· 运输时必须戴好盖帽,并用手推车运送。

· 大储量钢瓶应存放在与实验室有一定距离的适当设施。存 放地点应上锁并适当标识。

· 不应放置在散热器、明火或其他热源或会产生电火花电器 附近,也不应置于阳光直晒下。

· 不得焚烧。


a 当这些设备及房间不使用时,应该关闭主高压阀门。

b 使用和/或存放易燃气体钢瓶的房间应在门上用警示标志标明。

详细资料见参考文献 1 4951 以及附录 5


18 其他实验室危

实验室人员可能要面对与能量形式有关的危害包括火辐射以及噪声本章分别介绍 这些危害的基本情况。

火的危害

验室安全员与地方防官员之的紧密合为必要的除了化学害以外,也必须 考虑火对感染性物质播散的可能影响。这将可能决定灭火或控制火灾何为昀佳。

好由地方防官员协对实验室员进行火时的应急动和如何使用消防器材等方 面的消防培训。

在每个房间、走廊以及过道中应设置显著的火警标志、说明以及紧急通道标志。 在实验室中引起火灾的通常原因包括:

1、超荷用电

2、电保养不良,例如电缆的绝缘层破旧或损坏

3、供管或电线过长

4、仪设备在不使用时未关闭电源

5、使不是专为实验室环境设计的仪器设备

6、明火

7、供管老化锈蚀

8、易、易爆品处理、保存不当

9、不容化学品没有正确隔离

10易燃物品和蒸气附近有能产生火花的设备

11风系统不当或不充分。

消防器材应放置在靠近实验室的门边,以及走廊和过道的适当位置。这应包于装和沙以及灭火灭火器要定期进行检查和维护使其维持在有效期内不同类型和用途的灭火器见表 15

15 器的类型和

种类

可应用于

不能应用于

纸、木质纤维

电路和电器火灾、易燃液体、金属燃烧

CO2 气体灭火器

易燃液体和气体、电火灾

碱金属、纸

干粉

易燃液体和气体碱金属电路和

可重复使的仪器和备,因为残渣

电器火灾

难以清除干净

泡沫

易燃液体

电火灾


18 实验室危害

详细资料见参考文献 49

电的危害

对所有电器设备都必须定期进行检查和测试,包括接地系统。 在实验室电路中要配置断路器和漏电保护器断路器不能保护人只是用来保护线路不发生

电流超负荷从而避免火灾。漏电保护器用于保护人员避免触电。

实验室的所有电器均应接地,昀好采用三相插头。 实验室的所有电器设备和线路均必须符合国家电气安全标准和规范。

噪声

长期受过度噪声影响对人体是一种隐患有些类型的实验室仪(例如某些激光系统以及饲 养动物的设施)能产生显著噪声,造成工作人员的暴露。可以通过噪声检测来确定噪声的危害。 在资料显示噪声能控制达标的地方可以考虑采用工程控(例如在嘈杂仪器周围或在嘈杂区域 与其他工作区域之间采用隔音罩或屏障的方法)。在不能控制噪声水平的地方以及在按常规实验室工作人员会有过度噪声暴露的地方就要制订听力保护方(包括在噪声危害区域工作时的 听力保护)以及用于确定噪声对工作人员影响的医学监测方案。

电离辐射

辐射保护可以保护人员免受电离辐射伤害,包括:

1体的例如员可到临。辐体的括癌症(如 白血病骨癌肺癌以及皮肤癌并可能辐射暴露后许多年才发生对身不很严重的影响 还包括轻度的皮肤损伤、脱发、贫血、胃肠系统损伤以及白内障。

2传的例如暴露后代到症殖腺露对遗传影 响包括染色体损害或基因突变生殖腺的生殖细胞在受到高剂量辐射时能引起细胞死亡从而对 人造成生育能力的损害对女性还造成月经改变发育期胎(特别是815胎儿暴露,可能增加先天性畸型的危险,或增加以后发生精神损害或辐射诱发的癌症的危险。

电离辐射保护原则

为了限制电离辐射对人体的有害影响控制使用放射性同位素并遵守相应的国家标。 辐射防护的管理需要遵循以下四项原则:

1、尽能减少辐射暴露的时间

2、尽能增大与辐射源之间的距离

3、隔辐射源

4、用放射测量技术来取代放射性核素。

保护性措施包括以下几方面。

1、时可以通过下列方法来减少放射性物质操作过程中实验暴露的时间:

· 不使用放射性核素来进行新的技术和不熟悉的技术工作,直到操作熟练为止

· 操作放射性核素要从容、适时,不能急躁

· 确保在使用完毕后立即将所有放射源回收并储藏好

· 清除实验室内放射性废弃物的周期要短

· 在辐射区或实验室停留尽可能少的时间


实验室生物安全手册

· 进行必要的训练以昀有效地安排时间并对与放射性材料有关的实验操作进行适当计划 根据下述公式,在辐射区域所花的时间愈少,个人受照射剂量就愈小:

剂量=剂量率×时间

2、距对于大多数γ-和χ-射线来讲,剂量率与同辐射源之间的距离的平方成反比: 剂量率=常数∕距离 2

与辐射源之间的距离增大一倍相同时间内的暴露将减少为四分之一采用各种不同的装置 和机械方法来增加操作人员与辐射源之间的距离例如长柄的钳子镊子螺丝钳以及远程移液 器。要注意距离的少量增加就可能造成剂量率的显著降低。

3与实操作其他间放吸收辐射能量 辐射屏蔽助于控制人员的辐射暴露防辐射置材料和厚度的选择取决于辐射的穿透能(类 型和1.31.5cm厚的树脂木板属可能量β子提障保 护,而高能量的γ-射线和χ-射线则需要高密度铅才能提供保护。

4方法其他用时使用核素如果代方法, 使用穿透力或能量昀低的放射性核素。

放射性核素工作的安全操作规范 从事放射性物质工作的规则应包括以下四个方面的考虑: 1、辐区域

2、实区域

3、放性废弃物区域

4、记和应急反应

一些昀重要的规则包括以下几方面:

1、辐区域

· 只能在指定区域使用放射活性物质,

· 只允许必要的工作人员参与,

· 使用个体防护装备(包括实验室工作服、安全眼镜以及一次性手套),

· 监测实验人员的辐射暴露 使用放射性核素的实验室应设计成便于防护清洁和清除污染放射性核素的操作区域应位

于与主实验室邻接的小房间里或位于远离其他设施的实验室指定区域辐射区域的入口处应张

贴国际辐射标志(图12)。

12 辐射标志


18 实验室危害

2、实区域

· 使用溢出盘,内衬一次性吸收材料。

· 限制放射性核素的用量。

· 在辐射区域、工作区域以及放射性废弃物区域设置辐射源的隔离防护装置。

· 辐射容器用辐射标志标示(包括放射性核素种类、活性及检测日期)。

· 工作结束后,用辐射计测量工作区域、防护服和手的辐射情况。

· 使用经适当保护的运输容器。

3、放性废弃物区域

· 要经常从工作区域清除放射性废弃物。

· 要正确记录放射性物质的使用和处理情况。

· 要筛查超过剂量限度物质的剂量测定记录。

· 要制订并经常性操练应急反应计划。

· 应急反应中首先要帮助受伤人员。

· 要彻底清洁受污染区域。

· 如果可能,从安全办公室请求协助。

· 书写并保存事故报告。


实验室生物安全手册


第七部

安全组织和培



19 生物安全官员和安全委员

每个实验室都必须有完整的安全政策安全手册以及执行安全手册的支持程序实验室的 安全责任通常由研究所或实验室领导负责,部分责任也可委派给生物安全官员或其他适当人员。 验室安全也是所有管理者和实验室工作人员的职责,每个人都应对自己和同事安全负

要求工作人员能安全地进行工作并向他们的主管报告所有的不安全行为情况或事故应 由本单位或外单位人员定期进行安全审核。

生物安全官员

在可能的情况下应该任命一位生物安全官员以确保整个实验室始终遵守生物安全和计划。安全官员代表研究所或实验室的领导些职小单生物员可 能是微生物学家或一名专业人员他们可能以兼职的形式来履行这些职责不管其参与安全工作的程度如何任命安全该具的专能力能够符合生物物安的活进行查并生物安官员相关和国规章、 定和外还助实定标指定人员备微和生化学, 同时备基础的理学和生科学的技背景。实识、临床践知识和全(包括防护设 备知识以及与实验室设施的设计操作和维护有关的工程原理方面的知识于生都是极必要的。安全还应能与政、技术与后勤保障人员有效沟通。

生物安全官员的工作应该包括以下各项:

1、生安全、生物安全保障以及技术规章方面的咨询工作。

2、就术方法、程序和方案、生物因子、材料和设备进行定期的内部安全检查。

3、与关人员讨论违反生物安全方案或程序的情况。

4、核所有工作人员都接受了适当的生物安全培训。

5、进生物安全继续教育。

6所有潜在物质物品意外行调将调查结以 及处理意见向实验室主任和生物安全委员会报告。

7、就能的实验室感染与医务人员进行协调。

8、在现涉及感染性物质溢出或其他事故时,要确保清除了污染。

9、确废弃物的正确管理。

10保对所有设备在修理或维护之前已经过适当的消毒处理。

11常了解社区对卫生和环境问题的态度。

12根据国家规定,针对病原体运入∕运出实验室制订适当的程序。

13所有涉及感染性物质研究工作的计划方案以及操作程序均要在具体操作实施以前进行生物安全审查。

14织应急系统。

生物安全委员会

应组成生物安全委员会来制订所在单位的生物安全政策和操作规范研究方涉及感染性因


实验室生物安全手册

子、动物使用、重组 DNA 以及基修饰物质时,生物安全委员会应进行审查。生物安全委员会 的其他工作还包括危险度评估、制订新的安全政策以及仲裁安全事件纠纷。

生物安全委员会的成员应能体现其组织及学科的专业范围。安全委员会的基本组成可包括:

1、生安全官员

2、科

3、医人员

4、兽(如果进行动物试验)

5、技人员代表

6、实室管理人员代表。

生物安全委员会需要听取不同部门和专家安全官(例如在辐射防护工业安全防火等领域的建议并可能随时需要不同相关领域的独立专家地方主管部门以及国家管理部门的帮助。在讨论特别有争议的或敏感性的研究方案时,社区成员的参与可能也是有帮助的。


20 后勤保障人员的安

安全和昀佳的实验室操作很大程度上取决于后勤保障人员因此后勤保障人员也有必要进行适当的安全培训。

工程和建筑物的维护保养

维护设施器的熟练工程技术人员了解实验的工作性以及安全定和 程序。

对仪器设备进行维修保养后某些项目的测试工(例如生物安全柜在更换新过滤器之后的效果检查)应在生物安全官员的监督下进行。

那些没有内部工程和维护保养人员的实验室或研究机构应该与地的维护人员建立良好的关系,使他们熟悉该实验室的仪器设备和工作。

只有在经过清理之后并在生物安全官员和∕或实验室主管的监督下工程师和维修人员才 可以进入三级生物安全水平或四级生物安全水平实验室。

清洁(内务)保养

安全四级全水室应室成清洁清洁员只生物 安全∕或主管下才三级全水级生水平进行 洁工


21 培训规

断进行岗安全教育于维持实室工作人勤保障人的安全意是很重要的。在 生物安全官员和其他部门人员的协助下实验室主管在人员的培训工作中挥着重的作用安全上即有的和卫生培训的效果取决于管理实施激励性因素充分的上岗培训的沟通和昀终的组织目标下列各是保证生物安全培训规划行之有效的必备要

1、需求评估。过程包括确定相关的任务、重要性等级(以发生频率、危害程度及复 杂性来表示)以及完成这些任务的必要步骤等细节。

2、确立培训目的。昀令人满的情况是期望受培者在进行训之后,在工作 应用。培训的目的是要了解开展实验的条件以及所需的熟练水平。

3培训的内和方法。培训内容训者实现实验操作目标所必须掌握的知识 或技术。常由那些对工作相关要求为了解的员来确定物安全培训规的内容。其他的 内容可能集中在练习如何解决工作中发生的问题以及学纠正那些人们在使用某一技术过程中所犯的错误还不能确定某种教学方(专题讲座广播介绍机辅助教学交互式影方式等是否会比另一种更好教学方法的好坏很大程度上取决于特定的培训需要培训对象的构成等。

4不同培训对象的差异效的定要训对同人在资 文化以及所掌术水面都一致训规提高的操和个水平取决所采应采观的“手 则以字材效果员如要求提出对听人员调整虑这安全划的熟悉了教育原则。

5、针不同的学习要求。教学内容(例培训课程录像带、字材料等不应该同 授的技术或主题相冲突、相抵制或没有关联。例如,如果培训的目的是要提高解决问题的能力,那么在教育中就应该强调思维/推理而并非死记硬背要求培养创造性的行为和/或相应的 反(肯定/正确/可靠能力此外提供与实际工作条件相似的实践机会有助于将技能应用到实际工作中。

6、培训评估。评估有助于判断培训是否达到了预定效果。培训评估通常包括下四种 方式:

· 检查培训对象对所进行培训的反应

· 考核培训对象对所培训内容的记忆和/或操作执行情况

· 评估培训对象在工作中的行为变化

· 培训目的来考已有的效果。对培训效果昀完整的评估应包括全部上述四个方面考虑培训对象对所进行培训的反应是

一种昀不有效的评估方法因为这反应与培训对象对培训内容的实际掌握程度之间可能没有关

系,它也不应作为评估培训效果的唯一指标。


7、培训调整。衡量结果的标准多种多样,因此对培训效果的评估很难表明培训划究 竟是完全功还是彻底败。通常的果为,培训象与其他人比,对课内容的某分会有 更好的理解掌握和应用培训所造成的知识或能力上的不同或差异可能提示是否需要更长的 培训时间、采用其他的培训方法或聘请更有能力的教师。

WHO 供微生物安全培训的各种教具。


实验室生物安全手册


第八部

安全清


实验室生物安全手册


22 安全清

本安清单用以协助对微生物实验室(生物医学实验室)的安全和安全保障状态进行评估。

实验室建筑

1、是已经为设施的建设或建成后的评估考虑了试运行和认证指南?

2、实室建筑是否符合国家和地方的建筑要求(包括与自然灾害预防有关的必需要求)?

3、实室建筑总体是否整齐,并且周围没有障碍物?

4、实室建筑是否清洁?

5、地是否有任何结构性缺陷?

6、地和楼梯是否装修统一并能防滑?

7、工空间能否满足安全操作的需要?

8、活空间和走廊是否能够满足人员通行和大型仪器设备的搬移?

9、实台、家具和配件等能否正常使用?

10验台表面能否耐溶剂和腐蚀性化学品的侵蚀?

11否每个实验室房间都有洗手池?

12验室建筑在构造和维护中能否避免啮齿动物和节肢动物进入及滞留?

13有暴露在外的蒸汽管道和热水管道是否采取了隔热或防护来保护人员安全?

14否配备有断电时使用的独立供电系统?

15否只有授权人员方可进出实验室?

16已经进行了危险度评估来确保配备了相应的仪器设备和设施来进行所考虑的工作?

储存设施

1、是安排了储存设施、储存架来确保储存物品不会滑动、倒塌或掉落?

2设施堆积成人、火炸和匿的闲杂材料

品?

3、冰和储存区域是否上锁?

环境卫生和工作人员设施

1、建物是否处于清洁、有序和卫生的状态?

2、是有饮用水?

3、是分别给男女工作人员准备了清洁、足够大的卫生间和洗澡设施?

4、是提供冷热水、肥皂和毛巾?

5、是分别给男女工作人员提供了更衣间?


实验室生物安全手册

6、实室的每一位成员是否都配备了存放日常服装的设施(如带锁的橱柜)?

7、是有实验室成员进行午餐等活动的房间?

8、噪水平是否在可接受范围内?

9、是有适当的机构来收集和处理普通生活垃圾?

暖气和通风

1、工温度是否舒适?

2、对直接暴露在日光下的窗户是否装有遮光窗帘?

3、是有足够的通风,例如每小时至少换气六次(尤其是有机械通风装置的房间内)?

4、通系统是否装有 HEPA 过滤器?

5、机通风系统是否会影响生物安全柜和通风橱内部及周围的气流?

照明

1、普照明是否充分(例如 300400 lx)?

2、实台上是否有工作(局部)照明?

3、是所有的区域都光线良好,房间和走廊是否有黑暗或光照不良的角落?

4、日灯是否与实验台平行?

5、日灯色彩是否和谐?

保养

1、每实验室房间是否有足够的水槽和水、电、气的接口以保证工作的安全?

2、对保险丝、灯管、电缆、管道等是否有适当的检查和维护措施?

3、故是否可以在合理时间内排除?

4、实室的内部工程和维护保养是否由了解实验室工作性质的熟练工程师和技工来完成?

5、工和维护保养人员进出不同的实验室是否进行控制并需批准?

6没有内部和维人员已经当地和施工人并 让他们熟悉实验室仪器设备和工作?

7、是有清洁